夏宗玲，陈荣，邹素兰，王明丽(江苏常州市第一人民医院药剂科，常州市213000)

    目前已发现与药物代谢密切相关的细胞色素P450酶(CYP450)主要有CYP1～4[1]，其中以CYP3A亚族最为重要，占人肝脏CYP450总量的30%，主要成员包括CYP3A3、CYP3A4、CYP3A5和CYP3A7，成人肝脏中以CYP3A4为主[2]。CYP3A4的底物较多，据统计大约38个类别共150多种药物是其底物[3]，约占全部药物的50%，因此能够准确地评价CYP3A4的酶活性对药物相互作用研究以及临床合理用药都是十分重要的。目前国内、外多采用睾酮作为CYP3A4的探针底物[4，5]，通过测定肝微粒体体外代谢反应过程中睾酮的减少量或其代谢产物6-羟基睾酮的生成量来评价该酶的活性。文献[6，7]报道的高效液相色谱(HPLC)法多采用外标法测定，由于操作过程复杂，从而影响了睾酮的定量，较难准确评价CYP3A4的活性。本研究在借鉴前人研究的基础上，简化了样品处理方法，采用内标法建立了一种快速、高效、稳定的测定大鼠肝微粒体温孵体系中睾酮含量的HPLC法。

    1 材料

    1.1 仪器

    HPLC系统，包括2996紫外检测器、1525双元梯度泵、717自动进样器、Empower色谱工作站(美国Waters公司)；电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司，精密度：1×10-5g)；5417R高速台式离心机(德国Effendorf公司)；低温冰箱(日本Sanyo公司)；旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；恒温振荡水槽(上海精宏仪器设备有限公司)；雪花制冰机(北京长流科学仪器公司)。

    1.2 试药

    睾酮对照品(常州佳尔科药业集团有限公司提供，批号：090301，纯度：99.3%)；地西泮标准品(中国药品生物制品检定所，批号：230-9601，供含量测定用)；乙腈为色谱级；枸橼酸三钠盐、枸橼酸脱氢酶、氧化/还原型辅酶Ⅱ均购于Sigma-Aldrich(上海)试剂公司。

    1.3 动物

    Sprague-Dawley(SD)大鼠，♂，体质量200～250 g，月龄1.5个月，合格证号：SCXK(沪)2003-0003，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    色谱柱为Ultimate-XB C18(250 mm×4.6 mm ......