幸海燕，夏培元，戴 青，陈剑鸿，孙凤军

    (第三军医大学第一附属医院国家药品研究临床药理基地，重庆市 400038)

    HPLC法测定人肝细胞L02内外液中金丝桃苷的含量Δ

    幸海燕*，夏培元#，戴 青，陈剑鸿，孙凤军

    (第三军医大学第一附属医院国家药品研究临床药理基地，重庆市 400038)

    目的：建立测定人肝细胞L02内、外液中金丝桃苷(Hyp)含量的方法。方法：以80μg·mL-1的Hyp与L02共孵育0、3、6、12、24h后，采用高效液相色谱(HPLC)法测定细胞内、外液中金丝桃苷的含量。色谱柱为KROMASIL C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-0.4%磷酸(45∶55)，柱温为30℃，流速为1.0mL·min-1，紫外检测波长为360nm。结果：细胞外液中Hyp的标准曲线为Y＝35.412X-8.586(r＝0.9999)，表明Hyp检测浓度在2～200μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系；细胞内液中Hyp的标准曲线为Y＝35.759X-7.422(r＝0.9999)，表明Hyp检测浓度在0.1～10μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。细胞外、内液中Hyp的平均回收率分别为(96.00±2.43)%、(97.18±4.62)%，平均日内RSD分别为1.98%、4.36%，平均日间RSD分别为1.75%、2.86%。样品溶液处理后室温放置22h，未处理样品溶液于-20℃放置6d，平均RSD均<5%。结论：本方法简单、准确、线性范围宽、灵敏度高、精密度和回收率良好，可为进一步研究Hyp的抗氧化作用与机制奠定方法学基础。

    高效液相色谱法；人肝细胞L02；金丝桃苷

    金丝桃苷(Hyperoside，Hyp)属黄酮醇苷化合物，结构为槲皮素-3-半乳糖苷，是临床上疏肝解郁、清热解毒药方中金银花、菟丝子、贯叶连翘、山楂等的主要黄酮类活性成分。现代研究发现，Hyp对缺血性脑损伤、心肌损伤、肝损伤与肾损伤均有显著保护效应，其作用机制主要为抗氧化[1，2]。Hyp进入细胞并维持一定的浓度，是其发挥抗氧化作用的首要前提。因此，测定细胞内、外液中Hyp的含量有助于了解其在细胞内的潴留情况，以便为Hyp的抗氧化作用与机制研究提供充分的证据。本文以人肝细胞L02为研究模型，建立以高效液相色谱(HPLC)法测定L02细胞内、外液中Hyp含量的方法，为Hyp的抗氧化研究奠定理论基础。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    1100 HPLC系统(美国Agilent公司)；CL31R型离心机(美国Thermo Fisher Scientific公司)；Q型超纯水器(美国Milli-Qplus公司)；MODEL3111型细胞培养箱(美国Thermo Fisher Scientific公司)；超净工作台(苏州净化设备有限公司) ......