杨涓，高慧，韩冰，董江川(1.重庆医科大学附属第一医院，重庆市 400016；.承德医学院附属医院，承德市 067000；.天津中医药大学第二附属医院，天津市 00150；4.重庆医科大学中医药学院，重庆市 4011)

    雷公藤多苷(GTW)是临床应用最广泛的雷公藤制剂，具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤等药理作用。部分自身免疫性疾病女性患者服药后发生月经紊乱和闭经，故成为卵巢早衰的医源性因素之一[1]。既往研究表明，GTW对生殖功能具有抑制作用，表现为月经周期延长、闭经、血浆雌二醇(E2)水平下降，卵泡雌激素(FSH)升高，故认为其作用靶点在卵巢[2]，而对其生殖毒理的研究则以细胞凋亡为主要研究方向[3]，未见雷公藤对卵泡发育调控因子影响的研究报道。本课题组通过对大鼠卵巢结构观察及各级卵泡计数比较研究GTW对各发育阶段卵泡的影响，并通过对旁分泌调控因子卵泡刺激素特异受体(FSHR)、表皮生长因子(EGF)和缝隙连接蛋白 43(Cx43)mRNA的表达观察GTW对卵泡发育调控机制的影响，探讨其生殖毒理机制。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    PMr10AD型倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；JEM-1010型透射电镜仪(日本电子公司)；SYD-K2030型冷冻病理切片机(沈阳誉德电子仪器有限公司)；荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪(瑞士罗氏公司)；722型紫外分光光度计(上海天普分析仪器有限公司)。

    1.2 试药

    GTW片(湖南协力药业有限公司，批号:20050402)；Trizol RNA提取试剂(美国Invitrogen公司，批号:15596026)；LightCycle SYBR Green I RNA一步法扩增试剂盒和LightCycle质控盒(德国Roche公司)；基因引物由宝生物(大连)有限公司合成。

    1.3 动物

    SPF级SD大鼠，12周龄，♀，体重(260±10)g，由北京大学医学部实验动物部提供(动物生产许可证号:SCXK(京)2002-0001)。每日行阴道脱落细胞涂片，凡间隔4～5 d出现2次动情期者纳入实验。

    2 方法

    2.1 分组和给药

    将大鼠随机分为正常(等容蒸馏水)和GTWⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ(5、10、20、50、75 mg·kg-1)组。除正常组外，其余各组ig相应GTW片水溶液，每天1次，连续28 d，第29天处死大鼠 ......