彭志平，蒋明东，尹晓玲，文明，李少林(重庆医科大学基础医学院，重庆市400016)

    化学药物治疗是临床上肝癌治疗的重要手段之一，但存在于肿瘤细胞的多药耐药(Multidrug resistance，MDR)机制却严重阻碍了化疗药物的疗效[1]。研究[2]表明，多药耐药基因mdr1及其编码蛋白过度表达是肝癌细胞产生MDR的一条重要途径。因此，从基因水平研究抑制mdr1基因的表达来逆转肝癌细胞MDR，以期增加肿瘤化疗的敏感性是非常必要的。在本研究中，笔者以mdr1基因为靶点，设计并合成寡脱氧核苷酸(ODN)，其中ODN分为反义ODN(ASODN)和正义ODN(SODN)，从体外培养耐阿霉素(ADM)肝癌细胞HepG2/ADM来观察ASODN对其mdr1基因表达及化疗药物抑制肝癌细胞增殖的影响，探讨ASODN逆转肝癌细胞MDR的可行性。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    Thermo Forma细胞培养箱(美国赛默飞公司)；超纯水系统(美国Millipore公司)；480型聚合酶链式反应(PCR)仪(美国PE公司)；Fotodyne 60-2107型凝胶成像系统(美国Image公司)；550型全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司)；752型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)。

    1.2 试药

    逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒及DNA分子量标记X174HincⅡ digest Maker(日本Takara公司)；总RNA抽提试剂盒和转染试剂盒(转染试剂为脂质体)(美国Invitrogen公司)；蛋白质分子量标准(大连宝生物工程有限公司，范围：6.5～200 kDa)mdr1单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；二氨基联苯胺(DAB)检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；mdr1-ASODN、mdr1-SODN及引物(上海生工生物工程技术服务有限公司)；MTT(美国Sigma公司)；ADM注射用粉末(美国法玛西亚制药公司，批号：20081103，规格：每瓶10 mg)；顺铂注射用粉末(DDP，美国施贵宝公司，批号：20081104，规格：每支20 mg)；5-氟尿嘧啶注射液(5-FU，江苏同泰药业有限公司，批号：20081105，规格：250 mg∶10 mL)。

    ODN及引物序列见表1 ......