杨瑞仪，卢元媛，杨雪芹，冯丽玲，曾庆平(广州中医药大学热带医学研究所，广州市 510405)

    青蒿素是20世纪70年代由我国科学家根据古籍记载及民间验方首先从中草药黄花蒿Artemisia annuaL.中发现并率先应用的抗疟药。由于其安全性、有效性和速效性，以青蒿素为基础的联合治疗方案被世界卫生组织推荐在世界各大主要疟疾流行区推广应用。除此以外，青蒿素类药对于其他传染病(如血吸虫病、乙型肝炎等)和癌症[1]也具有一定的疗效。因此，青蒿素的药用价值非常大。黄花蒿是目前发现的唯一能合成青蒿素的天然植物，但产量很低，仅为0.01%～0.8%左右。有观点认为，在双氢青蒿酸前体向青蒿素转化的过程中，青蒿素发挥着活性氧(Reactive oxygen species，ROS)自由基储备池的作用，其独特的过氧桥结构被认为是双氢青蒿酸淬灭ROS生成氢过氧化物中间体后产生的最终产物[2]。Wallaart TE等[3]发现，经过夜霜季节后，青蒿素含量升高并伴随着双氢青蒿酸的下降，推测霜冻可能作为一种压力条件启动了双氢青蒿酸向青蒿素的转化。在环境胁迫(冷、热、强光、干旱、盐碱等)下，植物中由ROS造成的氧化胁迫是一种普遍现象。虽然氧化胁迫诱导植物次生代谢产物合成的研究已先后在人参、红豆杉、丹参、长春花中报道，但关于氧化胁迫与青蒿素合成之间相互关系的研究相对较少。本研究以低温为胁迫条件，研究其对黄花蒿氧化还原状态及青蒿素合成的影响。

    1 仪器与试药

    P680型高效液相色谱仪(美国Dionex公司)；Ultrospec 3300pro型紫外-可见光分光光度计(美国GE公司)；ABI7300型实时荧光定量PCR仪(美国应用生物系统公司)；SPX-250B-G型微电脑光照培养箱(上海博迅实业有限公司)。

    黄花蒿种子(重庆酉阳，华阳2号)由广州中医药大学青蒿研究中心鉴定为真品，广州中医药大学热带医学研究所保存；青蒿素标准品(批号：13806ED)、组氨酸(批号：423834)均购自美国Sigma-Aldrich公司；N，N-二甲基-对-亚硝基苯胺(日本东京化成工业株式会社，批号：3Q58C)；RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒(天根生化科技北京有限公司)；RevertAidTMH Minus First Strand cDNA Synthesis Kit(美国Fermentas中国公司)；SYBR Green Realtime PCR Master Mix(日本Toyobo公司)；引物由美国Invitrogen中国总公司合成；其余试剂均为国产分析纯 ......