刘培，周立军，苏艳芳，颜世伦(.天津大学药物科学与技术学院，天津市300072；2.河北化工医药职业技术学院，石家庄市 050026)

    金龙胆草为白酒草属植物苦蒿Conyza bliniiLevl.的干燥全草，主要分布于我国西南地区，系20世纪70年代四川省发掘的民间草药，具有清热解毒、消炎祛痰、止咳平喘之功效，临床用于治疗慢性气管炎、胃肠炎、肾炎、肝炎、痢疾、口腔炎、中耳炎、风火牙痛、湿疹、痔疮、外伤出血、烫火伤及牲畜创伤[1]。金龙胆草及其制剂在1997年版《中国药典》(一部)和《四川省药品标准》中收载[2]。目前关于金龙胆草是否具有抗癌活性的报道尚未发现。本研究以宫颈癌Hela细胞和肺癌SPC-A1细胞为模型，旨在通过研究金龙胆草总皂苷对Hela细胞和SPC-A1细胞增殖的影响，探讨金龙胆草总皂苷的抗癌机制。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    XD-101型倒置生物显微镜(南京江南光电股份有限公司)；SUNRISE型酶标仪(上海麦莎生物科技有限公司)；BioDoc-It 220型凝胶成像系统(美国UVP公司)。

    1.2 试药

    金龙胆草产于四川省凉山州，经天津大学药物科学与技术学院周立军副教授鉴定为真品；RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)；胰蛋白酶(美国Amresco公司)；蛋白酶K、RNA酶A(RnaseA，上海生工生物工程技术服务有限公司)；羊抗兔半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)单克隆抗体、羊抗兔α-actin单克隆抗体、羊抗兔IgG-HRP抗体(武汉博士德生物工程技术服务有限公司)。

    1.3 细胞

    宫颈癌细胞系Hela细胞和肺癌细胞系SPC-A1细胞，购自天津市肿瘤研究所。

    2 方法

    2.1 金龙胆草总皂苷的制备

    按顺序进行下列步骤：(1)将经过粉粹的金龙胆草在90%无水乙醇中加热回流提取2次，每次2 h，过滤后将滤渣用55%～65%的乙醇加热回流提取2 h并过滤，将2次滤液合并，然后减压浓缩至乙醇完全挥发；(2)将上述浓缩液用蒸馏水稀释至浓度为10～20 g·100 mL-1，然后在分液漏斗中用等量乙酸乙酯萃取4次以去除杂质，并将水层减压蒸至乙酸乙酯完全挥发，之后再于分液漏斗中用等量正丁醇萃取多次，直至萃取完全，最后将合并后的正丁醇萃取液减压浓缩而得到粗皂苷；(3)将上述粗皂苷溶于水并经大孔树脂D101柱层析，然后依次用水、30%乙醇、70%乙醇和95%乙醇进行梯度洗脱 ......