袁 斌，周岐新(重庆医科大学药学院药理教研室，重庆市400016)

    产生β-内酰胺酶是革兰阴性杆菌重要耐药机制之一。AmpC酶与超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)作为当前最具临床意义的β-内酰胺酶，具有极高的研究价值。有学者将细菌同时产生质粒型AmpC酶和ESBLs定义为超-超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)[1]。我们通过三维试验检测在川东北地区是否也存在同时产质粒介导AmpC酶和ESBLs的高度耐药菌株，通过聚合酶链式反应(PCR)实验确定AmpC酶与ESBLs基因型，建立一种可靠的实验室检测产SSBLs方法，指导临床合理用药，防止产SSBLs株的区域性流行。

    1 实验材料

    1.1 菌株

    收集自2008年1月-2009年6月从川北医学院附属医院临床分离革兰阴性杆菌237株(非同一患者同一部位重复分离)。所有菌株均经过法国生物梅里埃公司的Vitek 32全自动微生物鉴定仪进行鉴定。质控菌株：标准质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922，肺炎克雷伯菌ATCC 700603为ESBLs阳性对照菌，由四川抗菌素工业研究所提供；阴沟肠杆菌029M为AmpC酶阳性对照菌，E.coli C600为川北医学院药理教研室李苌清博士惠赠。

    1.2 试剂

    氨苄西林(AMP)购自中国药品生物制品检定所，头孢西丁(FOX)购自海南轻骑海药股份有限公司，头孢曲松(CRO)购自上海新先锋药业有限公司，氨曲南(AZ)购自重庆圣华曦药业，阿米卡星(AMK)购自江苏吴中实业股份有限公司，亚胺培南(IMP)购自默沙东制药有限公司，头孢他啶(CAZ)、头孢哌酮(CPZ)、头孢噻肟(CTX)和头孢哌酮/舒巴坦(CPZ/SB)由哈药集团制药总厂提供，哌拉西林(PIP)购自齐鲁制药厂，头孢吡肟(FEP)购自施贵宝制药有限公司，左氧氟沙星(LEV)购自山西威奇达药业有限公司，哌拉西林/他唑巴坦(PIP/TZ)购自珠海联邦制药股份有限公司，克拉维酸(CA)、氯唑西林(CLO)购自中国药品生物制品检定所；头孢噻肟纸片(30 μg/片)购于北京天坛药物生物技术开发公司；PCR反应系统(天根生化科技有限公司)。

    1.3 仪器

    Sakuma MIT-P细菌多点接种仪(日本佐久间公司)；PCR扩增仪(美国Bio-Rad公司)。

    2 实验方法

    2.1 MIC实验

    采用琼脂二倍稀释法，判断标准依照2008年美国临床实验室标准化协会(CLSI)抗菌药物敏感性试验稀释法标准作为判断 ......