张振海，陈玲玲，贾晓斌，贺俊杰，金 鑫(江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室，南京市 210028)

    β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺研究Δ

    张振海*，陈玲玲，贾晓斌#，贺俊杰，金 鑫(江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室，南京市 210028)

    目的：研究用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺。方法：采用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ，以转化率为指标，通过单因素试验考察温度、pH值、酶与底物质量比、底物浓度和反应时间对转化率的影响。结果：酶解反应的优化条件为温度50℃、pH＝5.0的枸橼酸-枸橼酸三钠缓冲液、酶与底物质量比1∶2、底物浓度1mg·mL-1、反应时间90min。结论：β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ，转化率高，工艺简单、可靠，反应条件温和。

    淫羊藿苷；宝藿苷Ⅰ；β-葡萄糖苷酶；生物转化

    宝藿苷Ⅰ为小檗科淫羊藿属植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.中的一种多羟基黄酮类单体成分，有较好的抗肺癌细胞活性，明显优于淫羊藿中其他黄酮苷类化合物，亦有文献报道其生物药剂学性质明显优于淫羊藿中其他黄酮类多糖苷[1]。药理研究表明，宝藿苷Ⅰ具有抗肿瘤、抗骨质疏松等作用[2～4]。有报道大鼠口服淫羊藿苷后在粪便和尿液中均检出宝藿苷Ⅰ，推测大鼠肠菌酶可将淫羊藿苷转化为宝藿苷Ⅰ，吸收入血的主要为宝藿苷Ⅰ[5]。宝藿苷Ⅰ在淫羊藿药材中的含量较低，由于极性相当的成分很多，故分离纯化较困难。酶解反应具有选择性高、反应条件温和、转化率高、分离纯化容易、对环境无污染及成本低廉等优点[6，7]。β-葡萄糖水解淫羊藿苷主要是C-7位去葡萄糖，能够选择性地切断淫羊藿C-7位的β-D-葡萄糖，效果优于纤维素酶。本试验研究了β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺，旨在为宝藿苷Ⅰ的工业化生产提供参考。

    1 仪器与试药

    高效液相色谱(HPLC)仪，包括600型泵、717自动进样器、2996DAD紫外检测器、Empower数据处理系统(美国Waters公司)；数显气浴恒温振荡器(金坛市双捷实验仪器厂)；AL204十万分之一天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；离心机(上海安亭科学仪器厂)。

    淫羊藿苷(陕西慧科植物开发有限公司，批号：ES20060310，纯度>98%)；纤维素酶、β-葡萄糖苷酶(夏盛实业集团有限公司)；柚皮苷酶(济宁和美生物工程有限公司)；0.45μm微孔滤膜(江苏汉邦科技有限公司)；宝藿苷Ⅰ标准品(笔者自制 ......