王婷玉，李俊，金芝贵，吴飞华，王小华，周倩(.上海交通大学医学院附属第九人民医院药剂科，上海000；.安徽医科大学药学院，合肥 3003)

    来氟米特是病情缓解药，能够延缓类风湿性关节炎(RA)的疾病进展，改善患者症状，提高其生活质量，被广泛用于RA的治疗[1]。来氟米特是一种前体药物，在体内代谢成活性代谢物丙二酸次氮酰胺(A771726)，以抑制二氢还原酶阻碍其合成嘧啶，从而抑制RA中淋巴细胞的增殖[2]。CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Tregs)是近年发现的一类具有独特免疫功能的细胞群，其以“主动”方式维持自身稳定，在调控外周自身反应性T淋巴细胞中发挥重要作用。本文以刀豆蛋白(ConA)刺激的胶原性关节炎(CIA)模型大鼠脾淋巴细胞为靶细胞，研究A 771726对体外培养的脾淋巴细胞中CD4+CD25+Tregs分化的影响，考察A771726能否通过直接上调CD4+CD25+Tregs从而抑制脾淋巴细胞增殖；再进一步研究A771726诱导CD4+CD25+Tregs分化的作用机制，包括CD4+CD25+Tregs特异性标志物Foxp3的表达以及免疫性细胞因子的分泌。以期深入了解来氟米特抑制淋巴细胞增殖，进而治疗RA的作用机制。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    Eclipse TE300型倒置显微镜(日本Nikon公司)；Muliskan MK3酶标仪(上海雷勃分析仪器有限公司)；Bio-RAD Power Pac Basic电泳仪(美国BIO-RAD公司)；FACScan流式细胞仪(美国BD公司)；Applied Biosystems基因扩增仪9700系统(美国Applied Biosystems公司)；GSG2000核酸/蛋白凝胶图像分析管理系统(珠海黑马医学仪器有限公司)。

    1.2 试药

    A771726原料药(美国欣凯公司上海代表处，批号：080716，纯度：96%)；Ⅱ型胶原(CⅡ，美国Sigma公司，批号：C7806)；小鼠抗大鼠FITC-CD4抗体和小鼠抗大鼠PE-CD25抗体(美国Caltag公司，批号：MR5101、MR6104)；RNA抽提试剂(Trizol)(美国Invitrogen公司，批号：15596-026)；转化生长因子β(TGF-β)酶联免疫(ELISA)试剂盒(上海森雄科技实业有限公司 ......