金航，张惠云(山东中医药大学中医药经典理论教育部重点实验室，济南250355)

    近年来，经前期综合征(Premenstrual Syndrome，PMS)已成为情志病证研究领域的代表性病种，本课题组的前期研究[1]已证实，41.9%的育龄妇女均有不同程度的PMS。PMS肝气郁证是PMS的主要亚型，是肝疏泄不及的表现，是以经前出现抑郁寡欢等情绪异常，月经来潮后症状自行消失为主要临床表现的病证。现已证实PMS症状的发生与中枢神经系统5-羟色胺(Serotonin，5-HT)能神经异常密切相关[2]。Ho HP等[3]等通过对5-HT受体及其与之相耦联的G蛋白研究认为，PMS的产生可能与5-HT受体及其信号转导异常有关。但目前对与编码控制5-HT合成、释放、重摄取、代谢以及受体活性有关的基因研究较少，如5-羟色胺转运体(Serotonin transporter，SERT)基因、单胺氧化酶(Monoamine oxidase，MAO)基因、5-羟色胺1A受体(Serotonin receptor-1A，5-HT1AR)基因等。

    为了进一步探索PMS肝气郁证发病的微观作用机制，本课题组从细胞水平研究PMS肝气郁证大鼠血清对海马原代神经元中5-HT1AR、SERT、MAO-A、MAO-B蛋白和基因表达的影响。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    高速低温离心机(上海天美科学仪器有限公司)；低温冰箱(日本三洋公司)；CO2培养箱(上海力新有限公司)；倒置显微镜(重庆光电仪器有限公司)；Tecan酶标仪(上海麦莎生物科技有限公司)；凝胶成像系统、FR-200A全自动紫外-可见分析仪(上海复日科技有限公司)；PCR扩增仪(大连宝生物工程有限公司)；ks 400图像分析系统(德国Zeiss公司)。

    1.2 试药

    经前舒颗粒(秦皇岛市山海关制药厂，批号：Z20053087)；神经基质、B27、谷氨酰胺(美国Gibico公司)；胎牛血清、多聚赖氨酸、MAO-B兔抗(批号：M1821)均购自美国Sigma公司；RNAisoTMPlus、Taq HS(不含 dNTP Mixture)、Rnase 抗化剂、dNTP Mixture、DL2 000 marker、Promega的RT反转录试剂盒(大连宝生物工程有限公司)；预染蛋白marker(美国Thermo Fisher Scientific公司)；BeyoECL Plus试剂盒(碧云天生物技术研究所)；5-HT1AR兔抗(批号：ab44635)、驴抗兔二抗(批号：ab16284)购自英国Abcam公司；驴抗羊二抗(批号：sc-2020)、MAO-A羊抗(批号：sc-18396)均购自美国Santa Cruz公司；SERT兔抗(美国Millipore公司 ......