黄金牡丹合剂对内毒素血症小鼠细胞因子的影响
抗炎,死亡率,1仪器与材料,2试药,3动物和菌种,2方法,1LPS的制备,2小鼠72h死亡率测定,3细胞因子含量测定,4统计学方法,3结果,1临床症候,剖检结果与小鼠72h死亡率测定,2细胞因子含量测定,4讨论
闻 凤,徐兴然,曾忠良,罗音久,赵爱珍,陈 超,林春蓉,张亚娟,赵 原(西南大学药学院,重庆 400715)内毒素(LPS)血症是指革兰阴性菌侵入血液,并在其中大量繁殖、裂解后释放出大量LPS的病理过程,通常由感染、烧伤、烫伤等因素引发[1],可表现为全身炎症反应综合征(SIRS)、感染性休克、缺血-再灌注损伤、弥散性血管内凝血(DIC)、多器官功能不全综合征(MODS)、多器官功能衰竭综合征(MOFS)等[2],死亡率极高,目前尚无特效治疗措施。黄金牡丹合剂(HJM)是西南大学药学院的科研处方,主药为黄芩、金银花、牡丹皮经提取其有效部位制成的中药合剂,其中含有黄芩苷、绿原酸、丹皮酚等有效成分,具有清热解毒、抗炎、抗血栓和免疫调节作用。笔者通过ip自制大肠杆菌LPS复制小鼠LPS血症病理模型,用HJM干预,初步探讨该方对LPS血症小鼠的保护作用及其机制。
1 仪器与材料
1.1 仪器
ELX800型酶标仪(德国Invitek公司);JY92-Ⅱ型超声细胞粉碎仪(宁波新芝生物科技有限公司)。
1.2 试药
HJM(西南大学药学院中医药教研室自制,批号:20100801,规格:1 g·mL-1);地塞米松磷酸钠注射液(DEXA,西南药业股份有限公司,批号:110317,规格:1 mL∶5 mg);白细胞介素(IL)-4、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、ELISA试剂盒(美国RD公司);水为无菌水。
1.3 动物和菌种
SPF级健康昆明种小鼠204只,体重(20±2)g,♀♂兼半;普通级新西兰兔2只,♂,体重(2.0±0.2)kg,均由第三军医大学实验动物中心提供(生产许可证SCXK(渝)2007-0003)。
O型大肠杆菌,由西南大学生物制药教研室提供。
2 方法
2.1 LPS的制备
取50 μL O型大肠杆菌(猪源致病性大肠杆菌菌株)加入到10 mL LB培养基中,37℃、120r·min-1振荡培养12 h,加入到含有50 mL兔全血的5000 mL新配制LB培养基中继续培养18 h,10000 r·min-1离心5 min收菌,生理盐水洗涤,加入适量生理盐水悬浮稀释,反复冻5次,超声细胞粉碎仪破壁,121℃高压灭菌20 min,分装备用,规格:5.02×1011cfu·mL-1。
2.2 小鼠72h死亡率测定 ......
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