姚雪静，李壮林(烟台荣昌生物工程有限公司，山东烟台 264006)

    RP-HPLC法测定注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白的含量

    姚雪静*，李壮林(烟台荣昌生物工程有限公司，山东烟台 264006)

    目的：建立测定注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(简称TACI-Fc)含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Vydac C18，流动相A液为含0.1%三氟乙酸的水溶液，流动相B液为含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液，梯度洗脱，流速为1.3mL·min-1，检测波长为280nm。结果：TACI-Fc进样量在5.0～20.0μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r＝0.9997)；方法平均回收率为99.71%，RSD＝1.14%(n＝9)。结论：本方法操作简便、重复性好、结果准确，适用于测定注射用TACI-Fc的含量。

    反相高效液相色谱法；重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体；融合蛋白；含量

    重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白是将人B淋巴细胞刺激因子的受体TACI(一种穿膜蛋白活化物)的胞外特定可溶性部分，与人IgG1的Fc部分构建成的融合蛋白(以下简称TACI-Fc)，用于类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的治疗[1～3]，目前国内正处于临床研究阶段。注射用TACI-Fc中含有精氨酸、组氨酸、甘露醇等辅料，由于辅料的干扰，采用《中国药典》[4]中常规的蛋白质含量测定方法无法对药物活性成分进行含量测定。为控制TACI-Fc成品质量，笔者拟建立TACI-Fc含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定方法，为注射用TACI-Fc的质量评价提供依据。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器

    1200型HPLC仪，包括紫外检测器、四元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、Chemstation色谱工作站(美国Agilent公司) ......