赵林，蔡金艳，周林，李黄金，周联(.广东药学院生命科学与生物制药学院，广州 50006；2.广州中医药大学临床药理研究所，广州 50405；.广东药学院药科学院，广州 50006)

    溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，其作用于N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺之间的β-1，4糖苷键，可使革兰阳性菌细胞壁中黏多糖成分分解[1]，因而具有杀菌能力，在医学上具有重要的应用价值。其可用于制备抗菌消炎药、抗病毒药，与抗菌药物合用可以治疗溃疡、口腔和鼻腔黏膜炎，另还具有抗肿瘤、增强免疫力的药理作用[2-4]。虽已应用多年，至今仍未出现耐药现象[5]。在全球耐药菌引起的疾病不断爆发的情况下，溶菌酶的研究和应用越来越多地受到人们的关注。

    溶菌酶广泛存在于动植物体内和人的正常体液中，其中鸡蛋清溶菌酶含量最丰富。目前溶菌酶纯化方法主要有结晶、盐析、超滤、离子交换层析法等。结晶法操作简单、成本低，但耗时长，酶的粗制和精制分别需要1周和1月以上的时间[6]；盐析法只能得到一定纯度的产物，酶比活力不高，只有13000 U/mg[7]；超滤法工艺简单，但滤膜容易堵塞，收率一般在50%左右[8]；层析法是获得高纯度溶菌酶的理想方法，应用较多的是阳离子交换层析法。在相关的层析研究中[9-12]，研究者较多采用静态吸附、洗脱溶菌酶，操作繁琐、耗时长，酶的吸附及杂质的去除效率都有待提高。本研究采用等电点沉淀结合一步阳离子交换柱层析来探索溶菌酶的高效分离纯化工艺，为其实验室制备和工业生产提供依据。

    1 材料

    SORVALL D-37520高速离心机(德国科竣公司)；DWD-1紫外检测仪、FB-2型恒流泵(上海金达生化仪器公司)；Z型层析柱(上海锦华层析设备厂)；Tanon 1220凝胶成像系统(上海天能有限公司)；Alpha1-2冻干机(德国CHRIST公司)；BCM-100生物洁净工作台(苏州净化设备有限公司)；Ultro-spec 1100 pro分光光度计(美国GE公司)；AUW120分析天平(日本岛津公司)。

    新鲜鸡蛋(市售)；阳离子交换剂羧甲基-琼脂糖凝胶(CM-Sepharose FF，美国GE公司)；十二烷基硫酸钠(SDS)、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、溴酚蓝、溶菌酶标准品(批号:080622，比活力:20000 U/mg)均为广州威佳科技有限公司产品；蛋白质低分子质量标准[宝生物工程(大连)有限公司，批号:D530A，分子质量范围:14～97 kD]；蛋白胨、酵母粉(英国OXOID公司)；NaCl、Na2HPO4、NaH2PO4、NaOH、HCl、甘油均为分析纯 ......