张秀梅，于晓玲，申玉超，骆振华(.辽宁医学院附属第一医院老年医学科，辽宁锦州00；.辽宁医学院附属第一医院普外科，辽宁锦州 00)

    动脉粥样硬化(AS)是常见的心血管疾病之一，常引起重要脏器的严重病变(如心肌梗死和脑梗死)，但其发病机制十分复杂。近年来，细胞间缝隙连接与AS形成的关系备受研究者的关注。组成缝隙连接的蛋白亚单位称为连接蛋白(Connexins)，现已发现有20种以上的Connexins亚型，其中内皮细胞表面有 Connexin 43、Connexin 37、Connexin 40 的表达[1]。Connexin 43、Connexin 40在改变内皮细胞功能和AS的发生发展中有着重要作用。另一方面，氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)在AS的发生发展中起着关键作用，内皮下脂质沉积是AS的始动因素，ox-LDL可通过多种机制促进AS的发生发展[2-3]。研究表明，他汀类药物除了调脂作用外，可通过多种途径发挥抗炎、抗氧化、改善内皮细胞功能等作用，但确切途径尚不清楚。本研究观察阿托伐他汀对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的Connexin 43、Connexin 40表达的影响，探讨其改善AS可能的机制。

    1 材料

    1.1 仪器

    CO2培养箱(美国Thermo forma公司)；倒置显微镜(日本Olympus公司)；超速离心机(美国Sigma公司)；CIAS-1000细胞图像分析系统(北京恒大图像视觉有限公司)；Power Pac3000电泳仪、EC-120电泳槽(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 药品与试剂

    阿托伐他汀原料药(美国Sigma公司，批号：PZ0001，纯度：≥98%)；达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)高糖细胞培养液、胰酶、磷酸缓冲液(PBS)(美国Gibco公司)；胎牛血清(美国Hyclone公司)；ox-LDL(广州奕源生物科技有限公司，批号：YB-002，规格：2.0 mg/ml)；兔抗人 Connexin 43(批号：bs-0651R)、Connexin 40(批号：bs-4087R)多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；庚醇、辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗兔的二抗、β-肌动蛋白(β-actin)、山羊血清(封闭液)、1×TBST洗膜液、二氨基联苯胺(DAB)显色液、Connexin 43蛋白二抗B液、Connexin 43蛋白二抗C液、Griess试剂由辽宁医学院实验中心配制。

    1.3 细胞株 ......