李维，李薇，吴文如#，王绪新(.广州中医药大学，广州 50006；.宜都市中医医院药剂科，湖北 宜昌 443300)

    参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)来源于钜蚓科环毛蚓属，是2010年版《中国药典》(一部)所收载的广地龙药材的原动物。广地龙虽被公认为品质最佳的地龙药材，但常因重金属超标而严重影响其临床用药安全[1]。为了解决这一质量难题，笔者团队曾对诱导养殖条件下参环毛蚓体内的重金属含量进行过实验研究，结果表明，蚓体与土壤中Pb和Cd存在浓度依赖关系[2]。这与国内外学者已确认的某些蚓体具有重金属富集作用的结果一致[3]。有研究表明，金属硫蛋白(MTs)能与Ag、Cu、Hg、Pb、Cd、Zn等重金属稳定结合[4]，是蚯蚓吸收、蓄积、运转、排泄重金属的最主要解毒方式[3]。参环毛蚓是否存在相同的诱导特性和解毒机制则一直有待验证。为此，笔者采用银饱和分析法测量了蚓体内MTs的含量，该法能够灵敏地反映出生物体内MTs水平的变化[5]。其原理就是通过饱和Ag竞争性替换体内与MTs结合的某金属，从而计算出该金属诱导的MTs的含量。借此探讨不同重金属对参环毛蚓诱导产生的MTs的相关特性。

    1 材料

    1.1 仪器

    RC5 CPWS型高速冷冻离心机(美国Bio-Rad公司)；876-2型真空干燥箱(上海锦屏仪表有限公司)；AEG-220型电子分析天平(日本岛津公司)；THZ-D型台式恒温振荡器(太仓市实验设备厂)；JENA novAA400型石墨炉火焰原子吸收光谱仪(德国Analytik Jena公司)。

    1.2 试剂

    牛血红蛋白(广州威佳生物科技公司)；甘氨酸(广州奇华盛生物技术有限公司，纯度>99.5%)；Pb(NO3)2、CdCl2、ZnSO4、CuSO4、CaCO3、Tris、盐酸(1.19 g/ml)、硝酸(1.42 g/ml)、氢氟酸(1.15 g/ml)、高氯酸(1.67 g/ml)、2.5%硝酸，均购于广州新生试剂公司，所有试剂除硝酸为优级纯外，其余均为分析纯；水为去离子超纯水。

    1.3 土壤(养殖基质)

    工业石英砂(30～40目、80～100目)购于广州绎丰研磨材料商行；苔藓土(pH为6～7)采自广州芳村花鸟市场。参考经济合作与发展组织(OECD)有关蚯蚓急毒研究中人工土壤的配制方法配制人工土壤[6]:工业石英砂69%(含30～40目20%，80～100目80%)，苔藓土10% ......