孙世宝，盛玉文，于立春，曲更庆，王庆军(辽宁医学院附属第一医院泌尿外科，辽宁 锦州 121001)

    膀胱癌有75%～85%是浅表性肿瘤[1]，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，膀胱癌术后灌注化疗是减少复发率及延长复发时间的必要措施。但长期应用丝裂霉素(MMC)灌注化疗会产生一定的副作用和复发风险。肿瘤细胞化疗的同时，耐药性的产生有多重机制，可能涉及到Bcl-2基因的异常表达[2]。塞来昔布是一种选择性环氧化酶2(Cyclooxygenase-2，COX-2)抑制剂非甾体消炎药，具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用[3]。近年来发现塞来昔布抑制肿瘤血管生成、增强治疗药物的敏感性与抑制基因Bcl-2的表达有关，Bcl-2的表达可以增强肿瘤的化疗疗效和避免术后复发[4]。低剂量的MMC联合使用塞来昔布不但可以提高疗效，而且还可以减少不良反应[5]。本研究探讨MMC与塞来昔布联合使用是否对浅表性膀胱癌T24细胞具有增殖抑制作用，并初步探讨其机制。

    1 材料

    1.1 仪器

    细胞计数仪(美国Beckman公司)；CO2培养箱(美国Thermo forma公司)；倒置显微镜(日本Olympus公司)；超速离心机(美国Sigma公司)；CIAS-1000细胞图像分析系统(北京恒大图像视觉有限公司)；PowerPac3000电泳仪、EC-120电泳槽(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 药品与试剂

    MMC原料药(批号:H20020163，纯度:99.9%)、塞来昔布原料药(批号:H20070325，纯度:99.9%)均由海正辉瑞制药有限公司提供；MTT注射用粉末(博大泰恒生物技术有限责任公司)；兔抗人Bcl-2多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；TaKaRa RNA、实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒(宝生物工程大连有限公司)；人细胞血管内皮生长因子(VEGF)、酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(上海众华生物有限公司)；二甲基亚砜(DMSO，美国Amresco公司)；RPMI 1640培养液(美国Gibco公司)。

    1.3 细胞

    T24细胞由中国科学院上海分院提供。

    2 方法

    2.1 溶液的制备

    用RPMI 1640培养液将MMC原料药配制成1000μmol/L溶液，-20℃避光保存，应用时稀释至0、2、5、10、25、50μmol/L。

    取塞来昔布原料药，用DMSO溶解配制成100μmol/L溶液 ......