邓守恒，王贤和，袁选举，李 芳，李林均，陈 萍(湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心，湖北十堰442000)

    肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药是导致化疗失败的主要原因。近年来，人们围绕这一难题进行了大量的研究，主要采用的方法有化学药物干预和基因治疗等。维拉帕米和环孢霉素A是被研究最多的化学药物，但由于其毒副作用大、特异性差，实际应用中效果并不理想。而基因治疗也存在着易被DNA酶降解、治疗效果不能持久等问题，从而使其临床应用受限。硒化壳聚糖是将壳聚糖与亚硒酸在酸性条件下，以混合金属离子为催化剂，通过拼合原理制备成的有机硒，具有高效低毒的特性[1]。硒和砷在化学周期表中属同族，研究[2-3]证实砷剂能恢复部分耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，推测硒剂也应具有相似的作用，本文对此进行了研究。

    1 材料

    1.1 仪器

    BMP型倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；Mod 550型全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 药品与试剂

    硒化壳聚糖(本院化学系合成，批号：100601-201016，硒含量：0.8%)；多柔比星(Doxorubicin，DOX)注射用粉末(浙江海正药业股份有限公司，批号：090606，规格：每支10mg)；MTT、甲基纤维素(美国Sigma公司)；磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)多克隆抗体及二抗(美国Santa Cruz公司)。

    1.3 细胞

    人慢性粒细胞白血病(CML)耐DOX细胞株(K562/DOX)购自中国医学科学院天津血液病研究所。

    2 方法

    2.1 细胞培养

    K562/DOX细胞培养于含10%胎牛血清、100u/ml青霉素、100u/ml链霉素和2u/ml谷氨酰胺的RPMI 1640培养基内，在培养体系中加入终质量浓度为0.6μg/ml的DOX以维持其耐药性，于37℃、饱和湿度、5%CO2条件下培养，每隔3～4d传代1次。

    2.2 MTT法检测细胞抑制率

    收集指数生长期的K562/DOX细胞以全培养液稀释成5×104ml-1的单细胞悬液 ......