李 霞，周望溪，席美凤(湖南永州市中心医院北院药剂科，湖南永州 425000)

    他莫昔芬(Tamoxifen)是一种选择性雌激素受体调节剂，被广泛应用于治疗乳腺癌和妇科恶性肿瘤[1-3]。根据国内外研究[4-5]表明，43%的患者在使用他莫昔芬后两年内都会产生非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)，导致肝脏脂质沉积，并可能进一步发展为脂肪型肝炎和肝硬化。近年来关于他莫昔芬导致脂肪肝的体外分子机制研究报道较少。本研究拟通过建立他莫昔芬诱导肝细胞产生脂质沉积模型，探讨他莫昔芬对肝细胞脂质合成与代谢途径的影响，并进一步明确其导致肝细胞脂质沉积可能的分子机制，为选择和开发治疗乳腺癌和妇科肿瘤更加安全和有效的药物提供理论基础。

    1 材料

    CFX96TM聚合酶链式反应(PCR)仪、凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司)；BX51显微镜(日本Olympus公司)。

    他莫昔芬原料药(批号：T5648，纯度：≥99%)和棕榈酸原料药(批号：57-10-3，纯度：≥99%)均购自美国Sigma-Aldrich公司；Trizol试剂(美国Invitrogen生命技术公司，批号：15596026)；乙酰辅酶A羧化酶(ACC)一抗及其磷酸化(PACC)一抗(美国Abcam公司，批号：ab63531、ab31931)；辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔二抗、MTT试剂(中国碧云天生物技术研究所，批号：A0208、ST316)；1640培养基和胎牛血清(美国Hyclone公司，批号：SH30809.01B、SV300087.02)。

    人肝癌HepG2细胞，由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所提供。

    2 方法

    2.1 细胞培养

    将HepG2细胞复苏后接种于50ml细胞培养瓶，用含10%胎牛血清的1640培养基培养，置于37℃、CO2孵育箱中，2d换液1次，传代至第3代时进行试验。

    2.2 HepG2细胞增殖检测

    将HepG2细胞接种于96孔板，接种密度为每孔6000个，分为6组，每组设3个复孔。空白对照组为不作处理的细胞，另外5组分别为用0.5、1、5、15、30μmol/L他莫昔芬处理后的细胞 ......