陈昌明，刘慧芳，曹雪姣，李新莉，辛毅，张翠丽(大连医科大学生物技术系，辽宁 大连 116044)

    姜黄素(Curcumin)是从姜科姜黄属植物姜黄(Curcuma longa)根茎中提取的一种酚性色素，具有抗炎、抗氧化、降脂、抗病毒、清除自由基的作用[1-2]，同时还可抑制小鼠肉瘤S180、人大肠癌细胞HT29、肾癌细胞293、肝癌细胞HepG2细胞生长[3-5]。有文献报道，姜黄素可抑制酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性，从而抑制肿瘤细胞增殖，并通过阻断细胞信号传导途径促发细胞凋亡[6]。本研究通过姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制、促凋亡和细胞周期各时相的变化以及抑癌基因p53蛋白的表达影响的研究，为姜黄素的抗癌研究和应用提供实验依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    E100型倒置相差显微镜[尼康仪器(上海)有限公司]；CO2孵箱、MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；FC500型流式细胞仪(美国Beckman公司)。

    1.2 药材

    姜黄于2012年4月购于大连中药店，经大连医科大学生物技术系李新莉讲师鉴定为真品。

    1.3 药品与试剂

    姜黄素对照品(天津一方科技有限公司，批号:20121259，纯度:≥98%)；MTT(美国Amresco公司)；抗体β-actin、p53、HRP辣根过氧化物酶(武汉博士德生物工程有限公司)。

    1.4 细胞

    人宫颈癌Hela细胞株由大连医科大学生物技术系实验室提供。

    2 方法

    2.1 姜黄素的提取

    姜黄置50Ⅸ恒温干燥箱过夜，粉碎过200目筛网。姜黄粉末按1∶10(m/V)加入70%乙醇浸提48h，抽滤浸提液，旋蒸，等分提取物分别以酸碱法和萃取法提纯，计算得率[7]。姜黄提取液置-20Ⅸ贮藏，备用。

    2.2 姜黄提取液质量浓度的测定

    准确称取20mg姜黄素对照品，加入200μl甲醇溶解得姜黄素对照品溶液(100mg/ml)。定量移取姜黄素对照品溶液(100mg/ml)适量，甲醇逐级10倍稀释至0.1mg/ml；分别取0.1mg/ml的姜黄素对照品溶液10、20、30、40、50、60μl与姜黄提取液30μl(甲醇溶解，质量浓度为0.1mg/ml)，均设3复孔，以甲醇定容至200μl量瓶中，检测420nm波长处的光密度(OD)[8] ......