阚微娜，滕艳坤，杨宏伟，隗 笑(辽宁省食品药品检验所，沈阳 110023)

    DTDPA-PITC联合柱前衍生化HPLC法同时测定复方氨基酸注射液中18种氨基酸的含量

    阚微娜*，滕艳坤，杨宏伟，隗 笑(辽宁省食品药品检验所，沈阳 110023)

    目的：建立同时测定含有半胱氨酸或胱氨酸的复方氨基酸注射液中18种氨基酸含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，以二硫代二丙酸(DTDPA)和异硫氰酸苯酯(PITC)联合作为柱前衍生化试剂。色谱柱为KromasilC18，流动相[A为0.1mol/L醋酸盐缓冲液(pH 5.38)-乙腈(93∶7，V/V)、B为乙腈-水(80∶20，V/V)，采用梯度洗脱]，检测波长为254 nm，流速为1.0m l/m in，进样量为3μl，柱温为35℃。结果：18种氨基酸在各自测定浓度的20%～180%的范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r≥0.999 0)；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.91%；平均回收率在95.7%～99.7%之间，RSD≤1.99%(n＝9)。结论：该方法准确、高效，实现了同时对复方氨基酸注射液中半胱氨酸以及其他17种氨基酸的准确定量。

    二硫代二丙酸；异硫氰酸苯酯；柱前衍生化；高效液相色谱法；氨基酸；半胱氨酸

    测定氨基酸含量方法很多，仅柱前衍生化测定氨基酸含量的方法就有近10种[1]。最常见的柱前衍生化方法为异硫氰酸苯酯(PITC)法、6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)法、邻苯二醛和9-芴甲基氯甲酸甲酯(OPA-FMOC)联用法以及2，4-二硝基氟苯(DNFB)法。AQC法和OPAFMOC法衍生化反应时间短，专属性较好，但衍生化试剂价格相对昂贵，衍生化产物不稳定，需要使用具备编程功能的自动进样器，将样品衍生化后立即进样，对仪器要求较高[2-3]。DNFB法所用的衍生化试剂属易爆、剧毒物质，有强致癌性，且极易损坏色谱柱，同时易干扰丝氨酸的测定[4]。PITC法与氨基酸和亚氨基酸均能反应，反应产物稳定，衍生化试剂价格低廉，是最具吸引力的氨基酸分析方法之一。

    半胱氨酸是多种复方氨基酸注射液[5-6]的主要成分之一，其不稳定，与胱氨酸可以相互转化，定量十分困难。很多复方氨基酸注射液的质量标准中并未对半胱氨酸的含量进行规定。Barkholt曾提出用二硫代二丙酸(DTDPA)将半胱氨酸和胱氨酸氧化成同一特定的S-2-羧乙基硫代半胱氨酸(Cys-MPA)，再对后者进行定量分析[7]。本研究即采用DTDPA将半胱氨酸或胱氨酸氧化成为稳定的氨基酸复合物 ......