王昕，陈莉芬，谭昌洪，谢代鑫(1.重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010；.重庆市第六人民医院，重庆 400060；.重庆市第三人民医院，重庆 400014)

    脑缺血再灌注损伤可造成神经元的坏死与凋亡，是脑梗死后遗症产生的主要因素之一，而神经元凋亡会引发机体产生系列病理生理反应，因此减轻神经元凋亡对保护脑功能具有重要意义[1]。半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族与凋亡关系密切，Caspase-12前体位于细胞内质网中，是细胞凋亡的内质网相关性死亡途径[2]。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides)是从宁夏特色植物枸杞(Lycium bararum)中分离出的主要多糖之一。现代药理学研究证实，枸杞多糖有多种药理学作用，如抗衰老、抗肿瘤、促免疫等[3-4]，但对脑卒中保护还未见文献报道。本研究拟通过大鼠脑缺血再灌注损伤模型，观察枸杞多糖是否对其具有保护作用，为临床脑缺血、脑卒中的治疗提供理论依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    Mini-PROTEAN3型垂直板式电泳仪(美国Bio-Rad公司)；电子天平(上海精科实业有限公司)；HMIAS-2000型高清晰度彩色病理图文分析系统(武汉同济医科大学)。

    1.2 药品与试剂

    枸杞多糖(上海源叶生物科技有限公司，批号:91087，纯度:>98%)；兔抗Caspase-12抗体(美国Santa Cruz公司)；辣根过氧化物(HRP)羊抗兔IgG(瑞典Amersham公司)；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(大连宝生物技术有限公司)。

    1.3 动物

    SPF级SD大鼠84只，♀♂兼半，体质量220～240 g，由重庆医科大学实验动物中心提供[实验动物使用许可证号:SCXK(渝)2011-0002]。

    2 方法

    2.1 模型的复制

    参照改良的Longa法[5]，采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型。ip 10%水合氯醛(350mg/kg)麻醉大鼠，将其仰卧固定，于颈部皮肤行常规纵行切口(约25.0mm)，暴露并钝性游离右侧颈总动脉(CCA)，结扎同侧CCA近心端和颈外动脉(ECA)分叉部并反向拉直ECA，距CCA末端约5mm处剪口，用直径0.26mm的鱼线沿颈内动脉(ICA)方向插入，深度由分叉部算约计(18.5±0.5)mm，于ICA近心端结扎，全层缝合切口，阻断2 h后，再灌注时抽出鱼线10mm ......