谢利霞，赵飞宇，周 蓓，杨万章(广东医学院附属南山医院药剂科，广东深圳 518052)

    帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见中老年人的慢性进展性中枢神经系统疾病，其病变与患者黑质纹状体多巴胺(DA)能神经元大量死亡，导致纹状体缺乏大量DA有关[1]。左旋多巴为拟多巴胺类抗帕金森病药，本身并无药理活性，通过血脑屏障进入中枢，经多巴脱羧酶作用转化成DA而发挥药理作用，改善帕金森病症状。左旋多巴一直是治疗帕金森病的最有效药物，被誉为PD治疗药物的“金标准”。中药丹参Salvia miltiorrhizabge.为唇形科鼠尾草属植物，其根可入药。其活性成分具有抗氧化作用，文献报道丹参素对缺糖-缺氧损伤后神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞的凋亡过程具有抑制作用，对神经细胞具有保护作用[2]，同时也有研究表明丹酚酸B可抑制6羟基多巴胺(6-OHDA)导致的SH-SY5Y细胞凋亡[3]。

    研究显示，鱼藤酮是继1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)之后所发现的第二个导致多巴胺(DA)神经元退变的外源性化合物。因此，鱼藤酮作为一种诱发PD的环境因素成为近来研究PD病因的热点之一。褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株(PC12)细胞因其在形态、生理、生化等功能特别是膜受体及递质合成上与中脑DA能神经元十分接近而被视为体外替代DA能神经元较好的细胞模型[4-5]。因此，本研究选择PC12细胞作为鱼藤酮体外DA能神经元毒性作用的研究模型。

    笔者以前的研究表明，鱼藤酮可导致分化PC12细胞凋亡[6-7]。本研究通过水溶性四氮唑(WST-1)法和Hoechst 33342标记染色法同样验证了上述结果，并发现左旋多巴和丹参联合作用可明显提高分化PC12细胞增殖率。

    上述研究提示左旋多巴与丹参在治疗PD中具有潜在互补机制，联合用药的功效与机制有待进一步探讨。本研究选用左旋多巴与丹参注射液联用为研究对象，采用鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡作为PD体外模型，运用WST-1法检测细胞相对增殖率，免疫印迹(ELISA)法检测3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)蛋白含量与20S蛋白酶体(PSM)活性，进而研究左旋多巴联合丹参注射液对鱼藤酮诱导的分化PC12细胞的影响，探讨其作用机制，为中西医结合治疗PD提供依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    DFM80C型荧光显微镜(上海蔡康光学仪器厂)；ELx800NB型多功能酶标仪(美国Bio-Tek公司)；3K15型离心机(德国Sigma公司) ......