饶进军，何关生，毛楠，吕琳，腊蕾(.南方医科大学药学院，广州5055；.广州医科大学附属第二医院药学部，广州 5060；.广州市番禺中心医院药学部，广州 5400；4.南方医科大学附属南方医院药学部，广州 5055)

    小细胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)属肺癌的一种未分化型，发病率约占肺癌的15%～20%，具有分裂指数高、倍增时间短、侵袭能力强等特点；确诊时大多已出现远处转移，失去手术治疗机会[1]。铂类联合依托泊苷是当前治疗SCLC的一线方案，但由于对药物的耐受以及肿瘤细胞的高转移率，临床治疗效果很不满意，患者的平均生存期仅有15～20个月[1]。Bmi-1属多梳基因(Polycomb group genes，PcG)家族，具有遏制抑癌基因表达(如INK4a/ARF)、诱导细胞恶性转化、维护肿瘤干细胞更新及促进癌细胞侵袭转移等作用，被认为是肿瘤恶性标记之一[2]，是一个潜在的抗肿瘤新靶点，目前已被试用于多种肿瘤[3-4]。近来研究发现，98.4%的SCLC病例Bmi-1呈现过表达，显示Bmi-1在SCLC细胞的生长繁殖中有重要作用[5]，但对于Bmi-1能否作为治疗SCLC的靶点，目前尚未见报道。本研究拟以人SCLC细胞H1963作为研究对象，通过小分子干扰RNA(siRNA)转染Bmi-1得到沉默Bmi-1基因，研究沉默Bmi-1基因对H1963细胞增殖与侵袭的抑制作用，以期为SCLC的治疗提供新思路和新方法。

    1 材料

    1.1 仪器

    倒置显微镜(日本Nikon公司)；5810R型高速离心机(德国Eppendorf公司)；M680型酶标仪、蛋白质印迹法(Western Blot)印迹转移电泳仪系统(美国Bio-Rad公司)；FACS Calibur型流式细胞仪(美国BD公司)。

    1.2 药品与试剂

    F12K培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)；siRNA(广州锐博生物科技有限公司，纯度：99.9%)；阳离子脂质体Lipofectamine RNA imax(美国 Invitrogen公司)；MTT(美国Sigma公司)；细胞周期检测试剂盒(武汉碧云天生物技术研究所)；Matrigel基质胶(美国BD公司)；兔抗人Bmi-1、抑癌基因(P16、P14)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、β-肌动蛋白(β-actin)单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG(IgG-HRP)二抗(美国CST公司)；增强化学发光(ECL)试剂盒(美国Milipore公司)；其余试剂均为国产分析纯 ......