胡 卫，张苗旋，郑崛村，王 玲，沈富兵#(.武汉大学医院，武汉 43007；.成都医学院检验医学院，成都 60065)

    溶瘤腺病毒抗肿瘤疗法是一种具有较高临床应用前景的新型抗肿瘤模式[1]，其原理在于改造腺病毒载体，使其可以在肿瘤细胞中优先复制，而大量复制的腺病毒最终将破坏宿主细胞。这种特异性复制能力的获得是靠不同的策略达到的，如修饰病毒的包膜蛋白使之高效感染肿瘤细胞[2]；掺入肿瘤启动子序列以控制病毒基因的表达和清除病毒在正常细胞中复制所必需的基因[3-4]。到目前为止，已经有成系列的条件性溶瘤腺病毒在进行临床前和临床试验[5]。

    本课题组构建的重组腺病毒TOA02即为条件性复制溶瘤腺病毒[6]，主要用于肝癌、肺癌、前列腺癌以及头颈部癌等多种肿瘤的抗肿瘤治疗，对正常细胞没有影响，是一种新型的抗肿瘤基因治疗制品。笔者将开展TOA02 的生物分布实验，以把握TOA02 在体内各组织脏器的分布情况和代谢动力学特点，并考察TOA02 是否扩散到生殖腺和非靶组织中，以便为预测毒性靶器官提供直接证据。鉴于TOA02只能在人类肿瘤中高度复制，笔者选择接种人肺癌细胞A549的荷瘤裸小鼠作为实验载体，通过瘤内注射药物，观察TOA02 在体内的分布情况。本实验采用定量聚合酶链式反应(PCR)检测法，选用腺病毒壳粒六邻体(Hexon)基因作为检测指标。

    1 材料

    1.1 仪器

    CO2培养箱[立德泰勀(上海)科学仪器有限公司]；倒置显微镜(德国Leica 公司)；FTC2000 实时荧光定量PCR 仪(加拿大枫岭公司)；超声波组织匀浆器(德国IEKA 公司)；ABI PRISM 7000型实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)。

    1.2 病毒与试剂

    TOA02(本课题组自制，批号：20100518，滴度：1.8×1012copies/ml，-80 ℃贮藏)；新生小牛血清(成都哈里生物工程有限公司)；胰蛋白酶(美国Gibco公司)；组织DNA提取试剂盒、实时定量PCR反应试剂[宝生物工程(大连)有限公司]。

    1.3 移植瘤细胞系和病毒株

    人肺癌细胞系A549、巨细胞病毒株AD169、Ⅰ型单纯疱疹病毒株KOS、Ⅱ型单纯疱疹病毒株HG252 和风疹病毒株M33由华西医院移植免疫学实验室提供，均为ATCC来源。

    1.4 动物

    2 方法

    2.1 肿瘤模型构建

    2.2 给药与取样 ......