刘占涛，杨志宏，赵永娟，冀立霞，郭锡春，岳 旺，尹 磊(青岛大学医学院药学院，山东青岛 266021)

    动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是最常见的心血管疾病之一，主要累及大中动脉，并可引起一系列继发性病变[1]。近年来，人们逐渐认识到动脉粥样硬化等心血管疾病与炎性反应有着十分密切的关系。血管内皮细胞受损时，释放大量的炎性因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等，引起平滑肌细胞增殖，最终形成动脉粥样硬化[2]。通过抑制血管平滑肌细胞移行及增殖的物质，可延缓或抑制动脉粥样硬化病变的形成[3]。

    吲哚-2，3-二酮的化学结构明确，生物活性广泛。本课题组前期研究表明，其具有抗炎和抗动脉粥样硬化的作用[4-6]。本研究采用大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5，观察吲哚-2，3-二酮对TNF-α所致A7r5 细胞增殖和细胞周期的影响，初步探讨吲哚-2，3-二酮对动脉粥样硬化炎性反应的作用机制，为其临床应用提供参考。

    1 材料

    1.1 仪器

    BB5060UV 型CO2培养箱(德国赫利公司)；SW-CJ-40 型超净工作台(上海苏净实业有限公司)；CKX41 型倒置显微镜(日本Olympus公司)；550型酶标仪(瑞典Rosys Anthos公司)；流式细胞仪(美国BD公司)。

    1.2 药品与试剂

    吲哚-2，3-二酮(青岛大学药物研发基地提供，纯度：99.7%)；高糖改良马丁琼脂(DMEM)培养基、胎牛血清、MTT(美国Sigma 公司)；碘化丙啶(PI)染液(南京凯基生物科技发展有限公司)；TNF-α(北京天来生物医学科技有限公司)。

    1.3 细胞

    大鼠主动脉平滑肌A7r5 细胞，购于中国科学院上海生命科学院细胞库。

    2 方法

    2.1 培养基和溶液的组成

    10%DMEM 培养基：10%胎牛血清、100 μg/ml 链霉素、100 u/ml青霉素、DMEM培养基。20%DMEM培养基：20%胎牛血清、100 μg/ml 链霉素、100 u/ml 青霉素、DMEM 培养基。磷酸盐缓冲液(PBS)：氯化钾0.10 g/L、磷酸氢二钠1.75 g/L、氯化钠8.00 g/L、磷酸二氢钾0.10 g/L，双蒸水配制。

    2.2 细胞的培养

    取A7r5 细胞用10% DMEM 培养基培养，在37 ℃下5%CO2的培养箱内传代培养 ......