许红涛，李 媛，何勇静，袁婷婷，张乃丹，张巧艳#(1.福建中医药大学药学院，福州 350108；.第二军医大学药学院生药学教研室，上海 00433)

    二仙汤收载于《中医方剂临床手册》中，由淫羊藿、仙茅、知母、关黄柏、当归和巴戟天6味中药组成，具有温肾益精、滋阴降火的双重调节功能，临床上用于治疗妇女更年期综合征和骨质疏松症[1-2]。为了明确二仙汤的活性物质基础，笔者以成骨细胞和破骨细胞为模型，对二仙汤水提物进行了抗骨质疏松活性成分的导向分离，以去卵巢骨质疏松大鼠为模型，对所获得的有效成分进行了抗骨质疏松的作用验证，明确二仙汤中的淫羊藿黄酮、知母皂苷和黄柏小檗碱为其抗骨质疏松的有效成分[3]。随后，又进一步以黄酮、知母皂苷和小檗碱为指标，优化了二仙汤的提取方法和抗骨质疏松部位的制备方法。为此，笔者建立了采用高效液相色谱(HPLC)法测定二仙汤提取物中抗骨质疏松主要有效成分淫羊藿苷、小檗碱和知母皂苷含量的方法，为质量控制提供科学依据。

    1 材料

    Cary 50紫外可见分光光度计(美国瓦里安公司)，LC-10AD HPLC仪，包括SCL-10A自动进样器、SPD-10A检测器、LC-10AD泵、Chrom Spirit Perfect工作站(日本岛津公司)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离子水。

    淫羊藿苷(批号：110737-201311，纯度≥98%)、盐酸小檗碱(批号：110713-201212，纯度≥98%)、菝葜皂苷元对照品(批号：110744-201310，纯度≥98%)均由中国食品药品检定研究院提供。

    淫羊藿、仙茅、知母、黄柏、巴戟天和知母购于上海华宇药材公司，经第二军医大学药学院张巧艳副教授鉴定，符合2010年版《中国药典》(一部)的要求。经测定，淫羊藿中淫羊藿苷的质量分数为2.1%，黄柏中小檗碱的质量分数为0.683%，知母中皂苷类成分的质量分数为6.07%。

    2 方法与结果

    2.1 二仙汤提取物的制备

    按照处方称取药材饮片，混合后，加50%乙醇提取3次，合并提取液。提取液减压浓缩至密度为1.05～1.10 g/ml，即为上柱样品液。将样品液按1倍柱体积上样量加入装有ZTC-1型大孔吸附树脂的色谱柱中，依次用12倍量水、8倍量50%乙醇和10倍量95%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏，60 ℃干燥，得棕褐色粉末，即为二仙汤提取物。

    2.2 淫羊藿苷的含量测定

    2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm ......