廖政邦，于五辈，赵 辉#(1.东莞市第五人民医院，广东东莞 53900；.河南大学药学院化学生物学研究所，河南开封 475004)

    宫颈癌是病死率最高的常见妇科肿瘤，严重威胁着女性健康。复发的宫颈癌往往对临床常用的抗肿瘤药物耐药，因此亟需开发以新方式引起肿瘤细胞死亡的药物以克服耐药[1]。自噬是继凋亡和坏死后发现的第3种细胞死亡形式，虽然细胞通过自噬可以降解受损、衰老和失去功能的大分子或细胞器，维持细胞的内稳态，但自噬的过度激活又会损伤细胞器，促进自噬性细胞死亡。近年来发现很多药物可通过诱导肿瘤细胞自噬产生抗肿瘤作用，例如维生素K3可通过细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases，ERK)途径介导宫颈癌HeLa细胞发生自噬[2]；麦冬皂苷B通过抑制蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB，又称Akt)、哺乳动物雷帕雷素靶蛋白(mTOR)通路介导HeLa细胞自噬[3]。以上研究表明，诱导肿瘤发生自噬是研发抗肿瘤药物的一种有效策略[4]。

    褐藻素(Fucoxanthin)是一种具有独特结构的海洋类胡萝卜素成分，具有消痰、软坚散结、利水作用。现代医学研究表明，褐藻素具有抗肿瘤、促凋亡、抗炎及清除自由基等药理作用。已有研究表明，褐藻素可通过抑制Akt、mTOR的磷酸化来诱导肝癌HepG2细胞发生凋亡和自噬[5]。由于药物抗肿瘤作用机制往往取决于肿瘤类型，因而褐藻素是否对宫颈癌具有抗肿瘤作用尚不得而知，本研究对褐藻素抗宫颈癌作用及其分子机制进行了研究。

    1 材料

    1.1 仪器

    FACSCalibur型流式细胞仪(美国BD公司)；DMI3000B型倒置荧光显微镜(德国徕卡公司)；Multiskan Spectrum型全波长酶标仪(美国热电公司)。

    1.2 药品与试剂

    胰蛋白酶、RPMI1640培养液、胎牛血清(美国Gibco公司)；褐藻素(纯度：98.0%)、洛霉素A1(Baf A1，纯度：98.0%)、新雷素(纯度：>98%)、氯化铵(NH4Cl)、MTT、核糖核酸酶(RNase)A、吖啶橙、3-甲基腺嘌呤(3-MA，纯度：98.0%)、U0126(纯度：98.0%)、碘化丙啶、一抗均购自美国Sigma公司；细胞裂解液试剂盒、Lyso-Tracker Red、Hoechst33342、AnnexinⅤ-FITC凋亡试剂盒均购于上海碧云天生物技术有限公司；Akt一抗、phospho-Akt(p-Akt)一抗、p21一抗、CDK2一抗、Cyclin D1一抗、Phospho-p70S6 kinase(p-p70S6K ......