刘小燕，李朝品，朱 涛(.安徽理工大学医学院，安徽淮南 300；.皖南医学院，安徽芜湖 400)

    中国圆田螺(Cipangopaludina chinensis)俗称螺蛳、田螺、田嬴、香螺，是在我国广泛分布的淡水贝类之一。《本草纲目》记载：“田螺利湿清热，止渴醒酒，利大小便；治脚气、黄疸”。近年，有关贝类多糖的研究证实其具有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等多种生物学活性[1-4]，引起了学术界关注。

    贝类多糖作为一种动物多糖，目前常用的提取方法有热水浸提法、碱解法、酶解法、酶碱结合法等[5]。本课题组前期对中国圆田螺多糖的水提工艺进行了相关研究，已经通过水提法成功获得贝类多糖，但是水提工艺费时较长(6 h)且得率不高(平均得率2.58%)[6]。动物多糖在提取过程中的关键之处是在不破坏多糖结构和活性的前提下有效去除蛋白，而酶解蛋白的作用较好且温和。为了进一步提高提取效率，本研究尝试采用木瓜蛋白酶提取中国圆田螺多糖。在单因素试验的基础上，进行了酶浓度、pH、酶解温度及酶解时间的正交试验，优选最优提取条件，以期建立一种简便、快速、有效的提取方法，为进一步研究中国圆田螺多糖的生物活性奠定基础。

    1 材料

    1.1 仪器

    1.2 原料、药品与试剂

    中国圆田螺，于2014年7月在安徽省淮南市焦岗湖采集，经皖南医学院李朝品教授鉴定为真品；葡萄糖对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：13041223，纯度：≥98%)；木瓜蛋白酶(北京化学试剂公司，批号：201402，酶活性：2 000 u/mg)；无水乙醇、丙酮均为分析纯。

    2 方法与结果

    2.1 提取工艺流程

    新鲜活体中国圆田螺，洗净，去壳→取螺肉粉粹匀浆→离心(离心半径16 cm，转速4 000 r/min，30 min)，弃上清→加40倍体积蒸馏水→木瓜蛋白酶浸提(不同酶浓度、pH、温度及时间下浸提)→升温至90 ℃灭酶→过滤→75%乙醇沉淀→漂洗→干燥→多糖粗品。其中木瓜蛋白酶浸提液制备方法为：称取木瓜蛋白酶10 g溶于pH 6.5磷酸盐缓冲溶液中，转至100 ml量瓶定容，制备成100 mg/ml的酶液，酶解时调节不同初始pH。

    2.2 中国圆田螺多糖得率计算

    多糖粗提物得率(%)＝(多糖粗提物质量/样品质量)×100%。式中，多糖粗提物质量即称取的多糖粗品质量(g)；样品质量即中国圆田螺螺肉质量(g) ......