李晓清，应坚(重庆市中医院肿瘤科，重庆 404100)

    肾阳虚证在中医基础理论研究和临床应用中均有重要地位，其模型研究一直是肾阳虚证研究的关键，已有的肾阳虚证模型先后采用了衰老大鼠、外源性药物、手术切除性腺等方法[1-4]。上述动物模型对该证型的实验研究产生了重要的促进作用。但随着研究的深入，这些模型某些方面尚不能完全满足实验要求:(1)大鼠的遗传背景复杂，可能会对机体的发病及治疗反应产生影响。(2)肾上腺轴的变化和证型之间的因果关系不能完全确定。长期生命活动中各种应激以及肾虚都可能造成HPA轴功能下降。(3)外源性糖皮质激素肾阳虚证模型中外源性糖皮质激素与肾阳虚证之间因果关系不直接。糖皮质激素不仅可与糖皮质激素受体(GR)结合，而且可与盐皮质激素受体(甚至其他受体)结合，进而导致机体产生复杂变化[5-8]。

    反义寡核苷酸(AS-ODN)可选择性抑制目的基因的表达，但天然AS-ODN的半衰期一般只有15～20min，笔者将AS-ODN经硫代磷酸化修饰后，用可降解聚乳酸微球包埋，以达到持续、稳定地抑制GR表达的效果。本实验拟通过小鼠皮下注射AS-ODN聚乳酸可降解微球抑制GR表达以建立肾阳虚模型。

    1 材料

    1.1 仪器

    55P27型超速冷冻离心机(日本Hitachi公司)；高效液相色谱仪，包括紫外检测器(美国Agilent公司)；DigBeh-LM16型小鼠自主活动计算机视频分析系统(上海吉量软件科技有限公司)。

    1.2 药品与试剂

    聚乳酸-羟基乙酸共聚物75/25(PLGA75/25，成都一平医药有限公司，黏度:0.2 dl/g，分子质量:15000)；Trizol?抽提试剂(美国Invitrogen公司)；逆转录(RT)试剂盒、聚合酶链反应(PCR)试剂盒和DL2000标志物(Marker)(日本TaKaRa公司)；AS-ODN(委托北京赛百盛基因技术有限公司合成，批号:2728142，纯度:99.9%)。

    1.3 动物

    3周龄C57小鼠30只，♂，体质量5～7 g，第三军医大学大坪医院野战科外研究所实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(渝)2008-0003。本研究通过我院医学伦理会论证。

    2 方法与结果

    2.1 AS-ODN聚乳酸可降解微球的制备

    根据Gene bank小鼠基因序列(序列号为X04435)设计，AS-ODN的序列为5′-TAAAAACAGGCTTCTGATCCT-3′ ......