柴士伟，董改英，瞿晶田，王 然(天津中医药大学第一附属医院药学部，天津 300193)

    蕲蛇之名首见于李时珍的《本草纲目》中，为蝰科动物五步蛇Agkistrodon acutus(Güenther)的干燥体，性甘，味咸，有毒，归肝经；具有祛风、通络、止痉的功效，用于治疗风湿顽痹、麻木拘挛、中风、半身不遂、抽搐痉挛、破伤风、麻风、疥癣等[1]。蕲蛇是我国传统名贵中药材之一，药用资源短缺，价格较高。2010 年版《中国药典》采用聚合酶链式反应法作为其鉴别方法，但对含量测定方法尚未涉及。笔者在本文中采用酸水解柱前异硫氰酸苯酯(PITC)衍生化的方法，建立蕲蛇中4种主要氨基酸的反相高液相色谱检测方法，并以这4种氨基酸的总含量为指标，对蕲蛇水煎煮工艺进行优化，以期较大程度地提取蕲蛇中有效成分，使这一宝贵的资源得到更合理的应用。

    1 材料

    1.1 仪器

    1200型高效液相色谱仪、G1314B型紫外-可见检测器(美国安捷伦科技有限公司)；超声清洗器(杭州汇尔仪器设备有限公司)；AL104 型电子天平(瑞士梅特勒-托利多集团有限公司)；氮吹仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；优普超纯水系统(西安优普仪器设备有限公司)。

    1.2 药材、药品与试剂

    蕲蛇样品[河北美威药业股份有限公司提供，批号：140201，产地：浙江；经我院主管药师李明老师鉴定为蕲蛇Agkistrodon acutus(Güenther)]；天冬氨酸对照品(批号：140624-200805，纯度：100%)、谷氨酸对照品(批号：140624-200805，纯度：99.5%)、L-羟脯氨酸对照品(批号：111578-200201，纯度：99.5%)、甘氨酸对照品(批号：140624-200805，纯度：100%)均来源于中国食品药品检定研究院；水为超纯水，甲醇和乙腈为色谱纯，PITC及其他试剂均为分析纯。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    色谱柱：Dikma Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：以0.1 mol/L醋酸钠溶液-乙腈(97∶3)为流动相A(用冰醋酸调节pH 至6.5)，以乙腈-水(4 ∶1)为流动相B，梯度洗脱；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm；柱温：43 ℃；进样量：10 μl。梯度洗脱程序见表1。 ......