鞠传霞，侯 琳，丛培阳，王嘉怡，孙福生，王 蕾，张 芳，刘 赛(.青岛大学药学院，山东 青岛 660；.威海卫人民医院，山东 威海 6400)

    目前公认血管内皮细胞的损伤及其功能异常是多种心血管事件发生的始动、关键性环节[1]。氧化应激是氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、肾素-血管紧张素系统、同型半胱氨酸等危险因素导致内皮细胞损伤的共同通路[2]。青岛大学医学院药理教研室从栉孔扇贝裙边中提取出有效成分——扇贝糖胺聚糖(Scallop skirt glycosaminoglycan，SS-GAG)，已获得发明专利(ZL 200410035656.3)。前期研究发现50、100、200 mg/L SSGAG能对抗OX-LDL、多聚阳离子、Fenton体系和过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)氧化应激损伤[3-6]，保护血管内皮细胞。本研究拟通过OX-LDL 复制HUVEC 损伤模型，从细胞和分子水平进一步研究其作用机制。

    1 材料

    1.1 仪器

    FACS Calibur型流式细胞仪(美国BD公司)；7600型全自动生化分析仪(日本Hitachi 公司)；RG 3000 型实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)仪(德国Qiagen公司)；2100 C型自动酶标仪(美国Rayto 公司)；Trans-Blot SD 型半干电转膜仪(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 药品与试剂

    SS-GAG(青岛大学医学院药理教研室，纯度：96%)；RPMI 1640 培养基、胎牛血清(美国Hyclone 公司)；MTT(美国Sigma 公司)；乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)测试盒(上海碧云天生物科技有限公司)；Trizol(上海Invitrogen公司)；反转录试剂盒(美国Promega 公司)；小鼠抗人NOX4 单克隆抗体、小鼠抗人β-actin单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠免疫球蛋白G(IgG，北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.3 细胞

    HUVEC购自中国科学院细胞库。

    2 方法

    2.1 OX-LDL制备及鉴定

    利用CuSO4修饰低密度脂蛋白制备OX-LDL，采用硫代巴比妥酸法鉴定[3]。

    2.2 细胞培养与分组

    HUVEC 接种于培养瓶内，用含10%胎牛血清、1×105u/L青/链霉素双抗的RPMI 1640 培养基 ......