孙 蓓，叶因涛，王 冬，钱钧强，娄建石(.天津医科大学肿瘤医院/国家肿瘤临床医学研究中心/天津市“肿瘤防治”重点实验室，天津 300060；2.天津医科大学基础医学院，天津 300070)

    肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其病死率居各种肿瘤的首位,对人类健康和生命构成了极大的威胁。丹参是临床最常用的活血化瘀中药，二氢丹参酮(DTS)是丹参的脂溶性活性成分之一，具有菲醌结构，通过引起DNA损伤从而抑制肿瘤细胞的DNA合成[1-2]。近年来的研究证实，DTS不仅具有天然抗氧化、抗心血管及抗菌消炎的药理作用,而且还具有明显的抗肿瘤活性，尤其是体外抗肿瘤活性，而对正常组织细胞的毒性却很小[3-5]。目前对于DTS 诱导人肺癌GLC-82 细胞凋亡及机制的研究鲜有报道。故笔者拟通过研究DTS 对人肺腺癌GLC-82 细胞的抑制作用，并探讨其可能的作用机制，为研发新型防治肺癌的药物制剂提供实验依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    Thermo 371 CO2培养箱(美国Thermo Electron 公司)；Cyto FLEX 流式细胞仪(美国Beckman 公司)；MODEL 680 酶标仪(美国Bio-Rad 公司)；CP225D 电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。

    1.2 药品与试剂

    DTS 粉末(上海源叶生物公司，批号：YY90060，纯度：>98%)；青霉素-链霉素混合液(北京索莱宝科技有限公司，批号：P1400，规格：青霉素10 ku/ml、链霉素10 mg/ml)；RPMI1640 培养液(北京百诺克医药生物技术有限责任公司)；MTT(上海生物工程有限公司)；二甲基亚砜(DMSO，中国医药集团)；胎牛血清(美国Hyclone公司)；磷酸盐缓冲液(PBS，北京百诺克医药生物技术有限责任公司)；Annexin Ⅴ-FITC/溴化丙啶(PI)双染凋亡试剂盒，Bcl-2、Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(Caspase-3)和β-actin抗体(美国BD公司)。

    1.3 细胞

    人肺腺癌GLC-82 细胞由天津医科大学肿瘤研究所免疫室提供。

    2 方法

    2.1 细胞培养

    从液氮罐中取出冻存的肺癌GLC-82 细胞液，立即投入37 ℃温水浴中复苏，使细胞冻存液在1～2 min 内融化。细胞冻存液清洗后，用RPMI1640 培养液(含10%新生牛血清及青霉素-链霉素混合液)培养细胞 ......