黄 洁，王孝功，单 敏，田福元(.西安市食品药品检验所，西安 70054；.西安迪赛生物药业有限责任公司，西安 7006；.陕西万信医药采购供应站，陕西咸阳 70065)

    脑蛋白水解物的提取工艺优化

    黄洁1*，王孝功2，单敏1，田福元3(1.西安市食品药品检验所，西安710054；2.西安迪赛生物药业有限责任公司，西安710016；3.陕西万信医药采购供应站，陕西咸阳710065)

    目的：优化脑蛋白水解物的提取工艺。方法：以pH约为9的碱性提取液进行提取；以总氮含量、与脑蛋白水解物(丽珠赛乐)肽图的相似度的综合评分为指标，通过L9(34)正交试验优化猪脑(1 kg)水解工艺中胰蛋白酶的加入量、胃蛋白酶的加入量及水解时间，并进行工艺验证试验。结果：最优提取工艺为胰蛋白酶加入量8 g、胃蛋白酶加入量5 g、水解时间12 h；验证试验中所制脑蛋白水解物的总氮含量分别为5.20、5.18、5.20 mg/ml(RSD＝2.22%，n＝3)，肽图相似度分别为93%、94%、96%(RSD＝1.62%，n＝3)，综合评分分别为0.911、0.917、0.932(RSD＝1.18%，n＝3)。结论：优化的生产工艺合理、提取效率高，产物肽图相似度高。

    脑蛋白水解物；提取工艺；正交试验；总氮含量；肽图相似度

    脑蛋白水解物注射液是一种猪脑蛋白水解提取物，为多种游离氨基酸和低分子肽的混合注射液，是一种神经保护剂。其具有神经营养和神经保护的类似神经生长因子的作用[1]，主要用于治疗颅脑外伤及脑血管病等引起的记忆力减退及注意力集中障碍，辅助治疗脑功能不全，也用于治疗神经衰弱、蛋白质缺乏及蛋白质消化吸收障碍等[2]。本文以总氮含量和与脑蛋白水解物(丽珠赛乐)肽图的相似度为指标，优化了从猪脑中提取脑蛋白水解物的工艺，以期建立一种重现性好、脑蛋白水解物活性更高的生产工艺。

    1 材料

    1.1仪器

    1260型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；DK-S420型电热恒温水箱(上海慕航仪器设备有限公司)；Pall minimate超滤系统(美国Pall公司)；L-600型离心机(湘仪离心机仪器有限公司，离心半径：16 cm)；DS-1型组织粉碎机(上海比朗仪器有限公司)。

    1.2药品与试剂

    脑蛋白水解物注射液(商品名：丽珠赛乐，丽珠集团丽珠制药厂，批号：20140809321，规格：5 ml/支)；胰蛋白酶(批号：141043，活性：>2 500 U/mg)、胃蛋白酶(批号：140821 ......