李 玲，李 斌，幸海燕，陈剑鸿(第三军医大学第三附属医院药剂科，重庆 400042)

    ·实验研究·

    缺氧条件下人卵巢癌细胞对顺铂耐药与TLR9的关系研究Δ

    李 玲*，李 斌，幸海燕，陈剑鸿#(第三军医大学第三附属医院药剂科，重庆 400042)

    目的：研究缺氧条件下人卵巢癌细胞(SKOV3)对顺铂耐药与Toll样受体9(TLR9)的关系。方法：采用免疫荧光法检测破膜和未破膜SKOV3中TLR9的表达。取SKOV3，加入TLR9特异性激动剂CpG-ODN 2006(A组)及其同型对照CpG-ODN 2006 control(B组)作用6、12、24 h后，加入顺铂，以CCK-8法检测细胞抑制率。取SKOV3或经0(未加)、1、10、102、103μmol/LTLR9特异性拮抗剂氯喹预处理3 h后的SKOV3，加入SKOV3常氧(21%O2)、缺氧(1%O2)孵育6、12、24 h的细胞上清作用24 h后，加入顺铂，检测细胞增殖抑制率，计算预处理细胞缺氧时药物抑制率的降低倍数(HICR)；并采用Western blot法检测常氧24 h细胞上清(C组)、缺氧24 h细胞上清(D组)、缺氧24 h细胞上清+10μmol/L氯喹(E组)条件下SKOV3中多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果：TLR9在SKOV3的细胞膜和细胞质中均有表达。与A组比较，B组细胞增殖抑制率降低(P<0.01)。与常氧细胞上清比较，缺氧细胞上清作用后细胞增殖抑制率降低(P<0.05)。与未加氯喹比较，加入10、102μmol/L氯喹能明显降低HICR(P<0.01)，其中缺氧24 h细胞上清+10μmol/L氯喹降低最明显。与C组比较，D组细胞中MRP表达增强(P<0.01)；与D组比较，E组细胞中MRP表达减弱(P<0.01)。结论：TLR9受体在缺氧下可被激活，并可导致SKOV3对顺铂耐药，该作用可能与上调MRP表达有关。

    人卵巢细胞；缺氧；化疗敏感性；Toll样受体9；顺铂

    卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，目前除手术治疗外，顺铂是治疗卵巢癌的一线化疗药物。但卵巢癌细胞对顺铂的耐药严重影响了其治疗效果，因此，探索卵巢癌细胞耐药相关因素及机制，寻找有效逆转耐药的治疗靶点，对卵巢癌的治疗具有重要意义。

    Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)家族中的TLR9，是一种模式识别受体，可以识别微生物衍生的分子模式结构(如：m tDNA)，并引起受体的结构性变化，然后通过衔接蛋白M yD88的募集反应 ......