刘 冲，程 波，何 江，杨伟俊，地力努尔·吐尔逊江，满尔哈巴·海如拉，薛桂蓬，魏梅梅，王 雪(新疆维吾尔自治区药物研究所/新疆维吾尔药重点实验室，乌鲁木齐 830004)

    新疆一枝蒿cDNA文库构建方法研究Δ

    刘 冲*，程 波，何 江，杨伟俊#，地力努尔·吐尔逊江，满尔哈巴·海如拉，薛桂蓬，魏梅梅，王 雪(新疆维吾尔自治区药物研究所/新疆维吾尔药重点实验室，乌鲁木齐 830004)

    目的：建立构建新疆一枝蒿cDNA文库的方法。方法：采用改良Trizol法提取一枝蒿幼嫩叶片总RNA，反转录成单链cDNA，长距离聚合酶链反应法(LD-PCR)合成双链cDNA；PCR产物经蛋白酶K消化，采用sfiⅠ酶切，酶切产物用CHROMA SPIN-400柱分级分离，回收0.4 kb以上的cDNA，以λTriplE×2噬菌体连接并进行体外蛋白包装，利用SMART技术构建一枝蒿全长cDNA文库；随机挑取文库中20个单克隆，电泳法测定原始文库滴度、文库容量、cDNA插入片段的重组阳性率与大小。结果：原始文库滴度为1.94×107pfu/m L，库容量为0.97×107pfu；cDNA插入片段重组阳性率为96%，大小为0.5～2.0 kb，平均为0.9 kb。结论：所构建的高库容、高质量的文库可为新疆一枝蒿cDNA文库的构建提供基础。

    新疆；一枝蒿；cDNA文库；构建；功能基因

    新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)为菊科蒿属多年生草本植物，主要分布于我国新疆，其地上全草是新疆哈萨克医学常用药材。一枝蒿疗效确切、应用广泛，具有清热解毒、消食健胃、祛风凉血之功效，常用于治疗感冒、过敏、食积、蛇伤、疮疖[1]。民间谚语中记载着“家有一枝蒿，不怕被蛇咬；家有一枝蒿，百病都除掉”[2]。

    目前，一枝蒿主要依靠自然繁殖生长，加上无计划地采挖和过度放牧，其野生资源面临枯竭。而且一枝蒿有效成分酮酸类化合物结构复杂，人工合成困难。如何使该药用资源可持续发展具有现实意义，而构建cDNA文库是探索药材相关功能基因组学的重要手段。文献报道已经成功构建了人参[3]、丹参[4]、铁皮石斛[5]、甘草[6]、滇重楼[7]等药用植物的cDNA文库。因此，在本研究中，笔者以野生一枝蒿幼嫩叶片组织为材料，利用SMART(Sw itching Mechanism At5′end of the RNA Transcript)技术，首次构建其幼嫩叶片组织cDNA文库，为进一步克隆一枝蒿相关功能基因及代谢途径研究奠定基础。

    1 材料 ......