2.4 Western blot法检测细胞中UGT1A和MRP2蛋白表达

    取细胞悬液100 μL，接种于6孔板中(2×105个/孔)，培养24 h贴壁后，将细胞分为空白对照组、模型对照组(这两组仅加入空白培养基)、RIF组(加入10 μmol/L的RIF)和GE预处理组(加入GE 60 mg/L)。将细胞置于37 ℃、5%CO2培养箱内继续培养24 h后，吸尽孔中液体，PBS冲洗3遍；除空白对照组细胞加入培养基外，其余各组细胞均加入80 nmol/L的TP，置于37 ℃、5%CO2培养箱内继续培养18 h。收集细胞于EP管中，加入蛋白裂解液裂解，涡旋振荡，低温离心，收集上清液(即细胞总蛋白)。采用BCA 蛋白定量试剂盒测得蛋白浓度并进行电泳操作，湿法转膜，5%脱脂奶粉封闭，分别加入兔UGT1A(1 ∶ 2 000)、MRP2(1 ∶ 500)一抗，4 ℃孵育过夜；TBST洗膜3遍后，分别加入相应二抗(1 ∶ 5 000)，室温孵育1 h；TBST洗膜3遍后，化学发光法发光显影。采用Image J软件测定条带灰度值 ......