2.5 细胞培养液中HYP含量检测

    将2～3代CFs接种于6孔板中，待细胞贴壁长至70%密度时，更换为不含血清的DMEM培养基饥饿处理24 h，然后按“2.4”项下方法分组、加药，将细胞置于37 ℃、5%CO2恒温培养箱中继续培养48 h后，移液器取细胞培养液500 μL，按照试剂盒说明书操作检测细胞培养液中HYP含量。

    2.6 细胞中ERK1/2、p38 MAPK、p-ERK1/2、p-p38 MAPK蛋白表达水平测定

    取细胞按“2.5”项下方法分组，加入相应浓度SCU处理细胞2 h后，加入Ang Ⅱ处理20 min，然后加入适量的蛋白裂解液冰上裂解细胞，提取总蛋白和磷酸化蛋白，二喹啉甲酸(BCA)法进行蛋白定量。取总蛋白依次经聚丙烯酰氨凝胶电泳、转膜、封闭等步骤后，加入ERK1/2(1 ∶ 1 000)、p-ERK1/2(1 ∶ 1 000)、p38 MAPK(1 ∶ 1 000)、p-p38 MAPK(1 ∶ 1 000)和GAPDH(1 ∶ 5 000)一抗 ......