色谱峰的准确定位是QASM法应用的关键，可采用保留时间差(指各待测成分与内参物间保留时间的差值)或相对保留时间(指各待测成分与内参物间保留时间的比值)等参数，并结合色谱图整体特征，以及每个峰的紫外吸收特征来定位待测成分色谱峰[15]。本研究通过考察保留时间差和相对保留时间两种参数在不同品牌HPLC仪和不同品牌色谱柱中的重现性。结果，保留时间差的波动较为明显(RSD>5%)，相对保留时间的波动相对较小(RSD<3.5%)。因此，采用相对保留时间法进行待测成分色谱峰的定位。但是对于成分复杂的样品，可选用定性用的对照品或“对照提取物”对待测成分进行定位，此法峰定位准确，受色谱条件及内参物变化干扰小[16]。

    2.14 QASM与ESM结果比较

    按“2.2”项下色谱条件，分别精密吸取“2.3”项下混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL，进样测定，记录虎杖苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的峰面积，分别采用ESM和QASM对5批复方黄芩片中6种活性成分含量进行测定，并利用统计软件SPSS 22.0对两组含量结果进行成组t检验，验证QASM方法的准确性。结果，两种方法测得6种活性成分含量比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

    3 讨论

    3.1 色谱条件的选择

    3.1.1 流动相的选择 在选择流动相时 ......