郝轩轩 王新陆 崔琳 王幼平 李彬 谢世阳 高原 朱明军

    摘 要 目的：觀察加参方浸膏对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的干预作用，并探讨其作用机制。方法：采用MTT法，考察400、200、100、50、25 μmol/L的H2O2与3.0、1.8、0.9、0.3、0.1 mg/mL加参方浸膏对H9c2心肌细胞活性的影响。将H9c2心肌细胞分为正常组、模型组、加参方组，除正常组细胞加入相应培养基外，模型组、加参方组细胞均采用50 μmol/L H2O2处理以诱导细胞发生氧化应激损伤，加参方组在模型组基础上加入0.3 mg/mL加参方浸膏干预处理。采用DAPI染色法，在荧光显微镜下观察细胞形态学变化；采用流式细胞仪检测细胞凋亡率；采用荧光定量逆转录-聚合酶链式反应法测定细胞中胱天蛋白酶3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平，Western Blot法测定Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果：50 μmol/L为H2O2最适造模浓度，0.3 mg/mL为加参方浸膏最适药物干预浓度。与模型组比较，加参方组细胞的形态改善，细胞凋亡率显著降低(P0.05)，表明其对细胞无明显毒性；当加参方浸膏质量浓度为0.9～3.0 mg/mL时，细胞OD值显著下降，差异均有统计学意义(P<0.05)，表明其对细胞已经产生明显的毒性作用。考虑到药物浓度过高也会对细胞造成损伤，因此选择无细胞毒性的最高质量浓度的0.3 mg/mL加参方浸膏进行后续试验。

    3.3 加参方浸膏对心肌细胞形态学的影响结果

    荧光显微镜下可见，正常组细胞核形态呈圆形或椭圆形，边缘清晰，染色均匀，呈现较弱的蓝色荧光；模型组有大量呈现亮蓝色荧光的凋亡细胞，细胞边缘不规整；加参方组的凋亡细胞数量较模型组少，大部分细胞呈现较弱的蓝色荧光，详见图1(图中，细箭头所指为正常细胞，粗箭头所指为凋亡细胞)。

    3.4 加参方浸膏对心肌细胞凋亡的影响结果

    流式细胞仪检测结果显示，与正常组比较，模型组细胞凋亡率显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，加参方组细胞凋亡率显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)。各组细胞流式细胞图见图2，凋亡率比较见图3。

    3.5 加参方浸膏对心肌细胞中Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响结果

    结果显示 ......