杨馨 张金娟 宛蕾 邓连力 廖尚高 何迅

    摘 要 目的：篩选太子参抗心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的活性部位，并探讨其作用机制。方法：太子参药材水提物经D101大孔吸附树脂柱以水-乙醇梯度洗脱，得水洗脱部位(Fr.A)、30%乙醇洗脱部位(Fr.B)、50%乙醇洗脱部位(Fr.C)、95%乙醇洗脱部位(Fr.D)。采用化学缺氧法以连二亚硫酸钠复制大鼠H9c2心肌细胞H/R损伤模型，采用MTS法检测经太子参各部位低、中、高剂量(Fr.A、Fr.B、Fr.C低、中、高剂量均分别为750、1 500、3 000 mg/L，Fr.D低、中、高剂量分别为5、10、20 mg/L)预处理后的细胞存活率，筛选活性最强部位。分别采用微板法、硫代巴比妥酸比色法、WST-1法测定经太子参活性最强部位低、中、高剂量预处理后细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性以及细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用蛋白质印迹法检测细胞胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果：经4个部位预处理后，Fr.A高剂量组，Fr.B高剂量组，Fr.C各剂量组的细胞存活率均较模型组显著升高(P0.05)。这提示Fr.C是太子参抗H9c2心肌细胞H/R损伤的活性最强部位，详见表1。

    3.2 Fr.C对H9c2心肌细胞H/R損伤后LDH、MDA、SOD水平的影响

    与正常对照组比较，模型组细胞培养液中LDH活性和细胞内MDA含量均显著升高，而细胞内SOD活性显著降低，差异均有统计学意义(P0.05)，详见图1、表3。

    3.4 Fr.C对H9c2心肌细胞H/R损伤后Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

    与正常对照组比较，模型组细胞H/R损伤后Caspase-3、Bax蛋白表达量均显著升高，Bcl-2蛋白表达量显著降低，差异均有统计学意义(P0.05)。这表明Fr.C中、高剂量能下调Caspase-3、Bax蛋白表达，并上调Bcl-2蛋白表达，详见图2、表3。

    4 讨论

    缺血性心脏病(Ischemic heart disease，IHD)是一类严重的心血管系统疾病，是目前导致患者死亡和心功能衰竭的主要原因[8]。针对IHD所采取的主要治疗方法再灌注疗法(如药物疗法、冠状动脉搭桥术、经皮冠状动脉介入术等)可能会加重患者心肌细胞结构及功能的损坏程度 ......