王振兴，李水芹，赵梓亦，王飞

    (1.成都中医药大学临床医学院，成都 610075；2.成都中医药大学附属医院脾胃病科，成都 610073)

    腹膜转移癌(Peritoneal carcinomatosis，PC)是恶性肿瘤细胞经血管、淋巴管转移至腹膜腔后最常见的继发性腹膜肿瘤，也是恶性肿瘤晚期最常见的并发症[1]。其临床治疗难度大，患者中位生存期短、预后差[2-3]。目前临床上采用全身化疗、腹腔化疗和姑息性手术治疗PC的疗效不佳，而细胞减灭术联合腹腔热灌注化疗(IHPC)是提高PC治疗效果的主要措施[4]。IHPC是一种通过将恒温(42～45℃)的化疗药液灌注入腹腔的治疗方式，其在预防和治疗腹膜种植转移癌方面的作用已得到了国内外学者的广泛重视[5]。但是由于化疗药物价格昂贵且存在骨髓抑制等毒副作用，使其与IHPC的联合应用受到了很大限制[6]。

    三棱、莪术是中药配伍中常用的破血化瘀药对[7]，《医学衷中参西录》载：“三棱气味俱淡，微有辛意；莪术味微苦，气微香，亦微有辛意；性皆微温，为化瘀血之要药。”本课题组在前期理论构建中将PC纳入中医学“癌毒”的范畴，并指出癌毒阻络、气滞血瘀是其主要病机[8-9]；在前期的临床观察中发现三棱、莪术组分配伍联合IHPC治疗恶性肿瘤晚期癌性腹水具有显著的疗效，且比单纯化疗药物治疗对患者的毒副作用更小。据此，本课题组认为将三棱、莪术组分联合IHPC用于PC可能具有较好的临床效果和较小的副作用。本课题组通过预实验考察了三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌细胞作用不同时间(0、6、12、24、48 h)的效果，发现其对肿瘤细胞的杀伤作用以作用24 h时为最强。因此，本研究选择易发生腹膜转移的结肠癌SW620细胞为对象，考察三棱、莪术提取物联合热疗作用24 h时对肿瘤细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响，为该疗法临床用于治疗PC提供实验基础。

    1 材料

    1.1 仪器

    3100型CO2培养箱(美国Fisher Scientific公司)；3-18K型冷冻离心机(美国Sigma公司)；X71型荧光倒置显微镜(日本Olympus公司)；Ⅱ型多功能酶联免疫检测仪(美国BioTek公司)；Navios流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司)；2C型精密电子天平(常州市幸运电子设备有限公司)。

    1.2 药品与试剂

    三棱免煎颗粒、莪术免煎颗粒[四川新绿色药业科技发展股份有限公司；两种免煎颗粒分别为采用三棱(批号：4301730)、莪术(批号：1362172)药材提取物制备所得的同批次制剂]；Matrigel基质胶、AnnexinⅤ-FITC/PI试剂盒(美国BD公司)；DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶(美国Hyclone公司)；羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)、碘化丙啶(PI)、MTT试剂、二甲基亚砜(DMSO)(美国Sigma公司)；胎牛血清、pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)(美国Gibco公司)；其他试剂均为分析纯 ......