2.4 碱性彗星实验

    将肝、肾、肺组织放入预冷的切碎液中反复刷洗后放入5 mL离心管内，加入3 mL预冷的切碎液，用剪刀剪碎组织(约100次)以释放细胞，制成单细胞悬液，然后轻轻吹打约15次后，放冰盒内备用。肝、肾、肺的单细胞悬液，用含20 mmol/L EDTA-2Na的HBSS溶液(pH 7.5)调整密度至2×105个/mL左右，再与凝胶以1 ∶ 10比例混合后铺片。另取大鼠采血管中外周血，直接与凝胶以1 ∶ 15比例混合后铺片。经制片、裂解、解旋、电泳、中和、脱水等步骤后分别制成肝、肾、肺、外周血的单细胞凝胶标本[9]。所有标本使用SYBR绿Ⅰ核苷酸胶体染料(1 ∶ 10 000)染色，并在放大倍数为200～400倍的荧光显微镜下拍照。使用Komet 6.0彗星图像分析软件进行分析，每只大鼠至少分析100个细胞中“刺猬细胞”的数量及100个彗星细胞的细胞核彗星拖尾情况。计算每组大鼠平均“刺猬细胞”数、尾DNA百分含量(尾DNA%)和尾距的中位数平均值。

    2.5 数据处理

    数据图和统计结果采用GraphPad Prism 7软件进行处理 ......