董航，黄嘉华，麦喆钘，陈柏行，黄培镇，蔡群斌，陈超，纪树亮，孙伟鹏，黄尹滢，周琦石#

    (1.广州中医药大学第一附属医院，广州 510405；2.广州中医药大学第一临床医学院，广州 510006；3.广州中医药大学第二临床医学院，广州 510006)

    骨缺损的治疗是骨科手术治疗中最困难的挑战之一。既往研究表明，当骨缺损的长度大于骨内直径的2.5倍时，如果不采用手术治疗干预，则骨缺损将难以通过自身修复[1]。目前，诱导膜(Masquelet)技术被认为是一种治疗骨缺损的有效手段，具有骨愈合时间短、技术要求低、并发症少等特点；而且诱导膜在成骨过程中，可促进机体分泌多种生长因子，加快骨愈合[2]。该技术主要分为两步:第一步是对骨缺损处进行清创，将骨水泥置入缺损处进行旷置，产生诱导膜；第二步是切开诱导膜，移除骨水泥，在诱导膜内填充足量的颗粒状自体松质骨[3]。

    目前广泛应用于临床的骨水泥是聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥，但由于其不能降解、缺乏生物活性等原因，常被其他材质的骨水泥取代[4]。磷酸钙骨水泥(CPC)由于具有性质稳定、可降解等特性，而且在低温环境下能保持自身理化性质稳定，因此已被认为是骨骼系统理想的药物载体[5]。不过单一的CPC治疗骨缺损效果欠佳，因此有学者尝试通过改变诱导材料(即骨水泥成分)来改变诱导膜的生物活性，从而提高成骨效能、改善临床疗效[6]。联合药物的局部释放可能是提高CPC治疗效果的一种新方法，但加入何种药物成分能增加诱导膜的成骨效能，目前报道甚少。已有研究发现，中药对于促进成骨具有良好疗效[7-8]。本课题组在前期研究中也发现，骨碎补总黄酮可上调诱导膜中转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达，还能促进骨缺损模型动物的骨痂形成、提高其局部碱性磷酸酶(ALP)和人骨成型蛋白2(BMP-2)的含量，具有促进成骨的作用[1]。姜自伟等[9]研究发现，骨碎补总黄酮可通过提高局部BMP-2和Smad1的含量以促进新骨形成、加快骨痂矿化和增强生物力学性能。但骨碎补总黄酮的局部释放能否促进诱导膜生物学特性的发挥、促进骨的再生与修复，其作用机制又是什么?目前国内外尚无相关研究。因此，本课题组采用载有骨碎补总黄酮的CPC干预治疗骨缺损模型大鼠，观察大鼠骨修复情况以及相关因子的变化，探索该载药骨水泥对诱导膜成骨分化的影响及作用机制，为其临床应用提供实验基础。

    1 材料

    1.1 仪器

    FD-X型数字遥控X线机(中山大学第一附属医院提供)；Eclipse CI型正置光学显微镜(日本Nikon公司)；7500型化学发光免疫分析仪(美国Beckman公司)；FluorChem Q型蛋白印迹成像和定量分析系统(美国Alpha公司)BT256型石蜡切片机(湖北阔海医疗科技有限公司)；12 cm手术用剪、10 cm眼用有齿镊、微摆锯(上海金钟医疗手术器械厂)；不锈钢六孔钢板(课题组自制)；Secura型分析天平(德国Sartorius公司)；HW-60型孵化摇床(常州朗越仪器制造有限公司) ......