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编号:13545991
两种重组蛋氨酸酶表达条件优化及其对人肺腺癌细胞GLC的抑制作用研究(3)
http://www.100md.com 2019年6月15日 《中国药房》 201912
     2.1.2 重组蛋氨酸酶表达量的检测 参考文献[7]方法检测重组蛋氨酸激酶的表达量,试验重复3次。取待测蛋白上清液、Marker(1.0 mg/mL)各10 μL,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(浓缩胶电压:80 V,分离胶电压:100 V),以考马斯亮蓝R250染色60 min后,以考马斯亮蓝脱色液脱色90 min,置于凝胶成像系统上成像。使用Image Lab 3.0软件对蛋白条带进行分析,以目标蛋白与Marker条带的灰度值比值来表示目标蛋白的表达量。

    2.1.3 诱导条件优化 参考文献[8],以目标蛋白(重组蛋氨酸酶4A1-MGL)表达量为指标,采用单因素试验对诱导前菌液起始OD600 nm值、培养温度、诱导时间等条件进行优化(该优化条件也适用于3B8-MGL[9])。

    ①菌液起始OD600 nm值:将诱导时间设为5 h,培养温度设为37 ℃,其余操作同“2.1.1”项,考察不同起始OD600 nm值(0.8、0.9、1.0、1.2、1.4、1.6)对4A1-MGL蛋白表达量的影响 ......
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