两种重组蛋氨酸酶表达条件优化及其对人肺腺癌细胞GLC的抑制作用研究(4)
2.5 重组蛋氨酸酶对GLC细胞抑制率的检测采用MTT法检测两种重组蛋氨酸酶对GLC细胞的抑制作用,并计算细胞抑制率[14],试验重复3次。将GLC细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基(以下简称“完全培养基”)中,置37 ℃、5%CO2的培养箱中培养(下同)。取对数生长期的GLC细胞适量,以完全培养基重悬后,按5×103个/mL接种于96孔培养板(每孔100 μL)中,培养过夜。将细胞随机分为空白组(无细胞、无药物)、对照组(有细胞、无药物)和4A1-MGL、3B8- MGL不同剂量组(均设置低、中、高剂量,分别为0.1、0.2、0.4 U/mL,以完全培养基为溶剂;剂量设置参考文献[15]),每组设置5个复孔。空白组、对照组分别加入完全培养基100 μL,各给药组加入含相应药物的完全培养基100 μL,分别于培养24、48、72 h时,弃去培养基,每孔加入5 mg/mL MTT溶液10 μL,继续培养4 h后,吸弃上清液,每孔加入DMSO 150 μL,振荡10 min。以酶标仪于490 nm处测定各孔OD490 nm值 ......
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