2.6 变异链球菌细菌生物膜结构的观察

    采用激光扫描共聚焦显微镜进行观察。按500 μL/皿的量將菌悬液加入激光扫描共聚焦专用培养皿中，设置鞣花酸组(1/2MIC)和阴性对照组(5%DMSO溶液)，每组设置3个平行皿，每皿加入500 μL相应样品溶液，置于37 ℃培养箱中培养24 h后，吸弃上清液，以无菌PBS洗去浮菌，用2%甲基纤维素固定后，加入制备好的活/死细菌荧光染料20 μL[按说明书将试剂盒中荧光染色剂SYTO9和碘化丙啶(PI)按照 1 ∶ 1(V/V)的比例混合溶于适当体积的无菌水中]，室温下避光孵育20 min，然后立即在激光扫描共聚焦显微镜下观察。活菌被SYTO9染色后发出绿色荧光，死菌被PI染色后发出红色荧光，SYTO9和PI染色叠加图中黄色表示活菌和死菌重叠处。

    2.7 变异链球菌中EPS生成情况考察

    采用苯酚硫酸法进行测定。按500 μL/管的量将菌悬液加入无菌离心管中，以5%DMSO溶液为阴性对照，考察不同质量浓度(1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC、MIC)鞣花酸对变异链球菌中EPS生成的影响，每个样品设置3个平行管，每管中加入5 mL相应样品溶液，然后置于37 ℃培养箱中培养16 h。在4 ℃条件下以5 000 r/min离心20 min(下同) ......