2.4 大鼠股骨组织的病理学观察

    采用苏木精-伊红(HE)染色法进行观察。取血后，将各组大鼠处死，取其左侧股骨，以10%甲醛固定，再用20%EDTA脱钙液进行脱钙，然后进行脱水(60 min);用二甲苯Ⅰ和Ⅱ进行透明(分别处理60 min)，常规浸蜡、包埋后进行组织切片(4 ?m)。行HE染色后，在光学显微镜下观察股骨的病理学变化。

    2.5 大鼠骨组织中BMP、Runx2、Osx mRNA表达情况检测

    采用实时荧光定量-PCR法进行检测。取大鼠右侧股骨洗净，取部分骨片(另一部分保存于-80 ℃)。采用Trizol法提取其总RNA，确定其纯度和浓度后，将总RNA反转录合成cDNA，并以cDNA为模板进行PCR扩增。反应体系(共20 ?L)：SYBR荧光染料10 μL，上、下游引物各2 μL，cDNA模板4 μL，无核酸酶水2 μL。反应条件：94 ℃预变性5 min; 95 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min ，共40个循环。以GAPDH作为内参，采用2-ΔΔCt法计算各目标基因mRNA的表达水平(式中Ct表示荧光信号强度达到设定阈值时经历的循环次数) ......