采用免疫荧光染色法进行检测。末次给药24 h后，每组取3只小鼠，颈椎脱臼处死，冰上操作取出其完整大脑，用冰冻组织包埋剂将大脑组织完整包埋，然后即刻緩慢放入液氮中快速固定，随后将固定的脑组织标本转移到-80 ℃冰箱保存。临检时，取出冰冻脑组织标本，连续切片(厚度约为6 μm)后，将切片转移至-20 ℃的甲醇溶剂中通透10 min，再用磷酸盐缓冲液(PBS)浸泡5 min×2次，最后在BSA中封闭40 min。加入Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)抗体(稀释比例均为1 ∶ 1 000)，4 ℃孵育过夜;用PBS浸泡5 min× 2次，加入同时含有Alexa Fluor 594标记的荧光二抗和荧光染料DAPI(稀释比例均为1 ∶ 1 000)的混合液，室温孵育1 h;用PBS浸泡5 min×2次，最后加入荧光猝灭剂封片。在倒置荧光显微镜下观察各组小鼠脑组织中Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的分布，并进行拍照。使用Image-Pro Plus 6.0软件测定目标蛋白的平均光密度值 ......