伊帕尔古丽·阿皮孜 贺宏吉 王昭志 李喆喆 卡迪热娅·艾克拉木 白静雅 王梅

    关键词去氢骆驼蓬碱;线粒体;Legumain酶;脂质体

    肝癌严重影响着人类的生活，其中，我国肝癌的发病例数占全球的55%[1-3]。在肝癌的药物治疗方面，由于化疗药物的全身毒性或严重不良反应，导致患者生存质量下降[4]。研究与开发安全高效的药物递送系统，有望降低化疗药物毒性反应的严重程度，同时维持或提高治疗效果。

    去氢骆驼蓬碱(harmine，HM)是从骆驼蓬种子中分离出来的生物碱。研究显示，HM通过抑制蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)磷酸化诱导胶质母细胞瘤细胞凋亡，并通过G2 细胞周期阻滞和线粒体途径诱导肝母细胞瘤HepG2 细胞凋亡[5-6]。然而，由于HM溶解度低且在大剂量下易引起神经毒性，导致其临床应用受限。线粒体是一种高度活跃的细胞器，通过不断分裂和融合来维持细胞的正常生理功能[7]。线粒体动力学失调通常会影响肿瘤细胞的能量供应、氧化还原信号和代谢功能。由于线粒体的功能障碍在肿瘤发展中起着至关重要的作用，已被确定为治疗肿瘤的关键靶点[8]。Legumain酶，又称天冬酰胺内肽酶，属于半胱氨酸蛋白酶家族，最初发现于豆类植物[9]。研究表明，Legumain 酶在不同类型的实体肿瘤中表达上调，其水平与肿瘤的恶性潜能呈正相关[10]。KA肽由Legumain 酶响应氨基酸序列和线粒体靶向肽KLA 序列组成，其双级靶向特点有待进一步考察[11-12]。

    为提高HM进入肿瘤细胞及其线粒体的效率，降低HM的毒副作用，本研究以大豆磷脂(soybean phospholipid，SPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidylcholine，DPPC)、胆固醇(cholesterol，Chol)，以及KA肽偶联的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000-KA)为材料负载HM，得到Legumain 酶和线粒体双级靶向HM脂质体(KA@HM-LPS)，并对其制剂学特性、体外抗肿瘤作用及生物相容性进行初步评价，以期为后续研究提供实验基础。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究的主要仪器有UV-2700 型紫外可见分光光度计[岛津(上海)实验器材有限公司]，R-2003 型旋转蒸发仪、SHZ-95B型循环水式多用真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，HWS-24 型电子恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)，KQ5200DE型超聲清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ......