刘 艺，陶 婷，刘 云，李艳丽，胡盼盼，姜艳娇，孙增先(徐州医科大学附属连云港医院/连云港市第一人民医院药学部，江苏连云港 222002)

    氯吡格雷活性巯基代谢物(clopidogrel active thiol metabolite，CATM，化学结构式见图1)是氯吡格雷发挥抗血小板疗效的最终活性物质[1]。CATM 化学结构复杂，C3—C16 双键和C4 位手性结构使其具有4 种构型，分别为H1(7S，3E，4S)、H2(7S，3E，4R)、H3(7S，3Z，4S)、H4(7S，3Z，4R)，其中H1 和H2 为反式CATM、H3 和H4为顺式CATM[1]。已有研究表明，人体内CATM 的构型为顺式构型[2]。目前市面上仅有反式CATM异构体H1、H2的标准品，使CATM的体内研究受限。

    图1 CATM化学结构式

    对CATM进行合成的现有技术中，常用的方法有化学合成法和生物酶肝微粒体催化法，其中化学合成法需要对C3—C16 双键构型和C4 位手性构型进行选择，步骤复杂[3]；生物酶肝微粒体催化法具有较高的生物选择性和转化效率，但肝微粒体成本高，酶催化反应条件严苛，同时因底物量受限难以得到足够的目标代谢产物[2]。已有研究显示，离体大鼠肝脏灌流法被广泛用于大鼠肝脏的生理、病理生理、肝损伤及药物代谢研究，兼具体外实验和整体动物实验的优点[4-6]。本实验拟采用(S)-2-氧氯吡格雷为底物，采用离体大鼠肝脏灌流法通过代谢途径制备CATM，旨在为顺式CATM的合成提供参考。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括肝脏器官灌流仪(徐州医科大学附属连云港医院临床药理实验室设计)、AKTA pure 型蛋白纯化仪(美国General Electric 公司)、DUC-23050-J00型真空冷冻干燥仪(英国GeneVac miVac公司)、Bruker avance ⅢHD 500 型核磁共振(nuclear magnetic resonance，NMR)仪(德国Bruker 公司)、Waters Acquity UPLC ⅠClass型超高效液相色谱仪(美国Waters公司)、AB Qtrap 4500 型质谱仪(美国AB Sciex 公司)、T1型氮气发生器(瑞士Gravimetrics公司)等 ......